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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sunmaocai

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助 关于PCR

pcr和RT-PCR的引物和反应条件是不是一样?
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huaxiaojiegg

银虫 (初入文坛)

看看吧

RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。使用天为时代公司的总RNA提取系统(如目录号 DP405和DP406),所获得的RNA的纯度高,基因组DNA污染少,用于RT-PCR系统可得到满意结果。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA,三种都可。
PCR反应体系与反应条件
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
8楼2008-10-09 08:48:42
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ericwangyp

当然不同了。晕,随便找本分子生物学书看看就知道了。
2楼2008-10-08 17:01:30
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sumertansy

铜虫 (小有名气)

得到第一链cDNA后,基本是一样了,呵呵
3楼2008-10-08 17:14:43
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chenliang_0513

铁杆木虫 (职业作家)

大哥,你先到google一下行不行啊~~~
我本将心向明月,奈何明月照沟渠?
4楼2008-10-08 19:21:39
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