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dailiang木虫 (正式写手)
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求助！荧光法测定Gus（β－葡萄糖苷酸酶）活性测定
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我要用荧光法测定gus活性，依照《植物基因工程》（王关林主编）上的方法。但是没有买到4-甲基伞形酮钠盐，只能买到4-甲基伞形酮（4-MU）。请问各位大侠应该如何配制4-MU的标准溶液用于绘制标准曲线？ 请各位高手不吝指教！ |
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2楼2008-10-08 19:05:50
dailiang
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3楼2008-10-09 08:57:57
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司马诸葛(金币+3,VIP+0):谢谢交流 7-26 08:53
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网上查到4-MU（分子量176)的物理性质是溶于水的，我配成1mM/L的母液时发现不能完全溶掉，实验室其他人没有用完的也是水溶解的，却是完全溶解的，可能我用的是一般的蒸馏水的缘故，当时我还对它的白色粉末过敏了！用M1508的时候也是用水溶的，不过我用stop buffer（无水碳酸钠）也配过是可以溶解的，你可以分别用水或者stop buffer试下，比较一下所作曲线的差异吧。结果就好。 1mM/L4-MU母液的配制： 称取4-methylumbelliferone（甲基伞形铜钠盐，MW=198.20），简称4-MUpowder19.8mg溶于100ml蒸馏水，4℃冰箱避光保存。 1uM（微摩尔）4-MU母液的配制： 取1mM/L 4-MU 的10ul 溶于10ml蒸馏水，4℃冰箱避光保存。 标准曲线我做过两个浓度的： 按下表配制4-MU梯度浓度液： 4-MU母液浓度 4-MU母液吸取体积 反应终止液体积ml 4-MU梯度浓度 1mM/L 100ul 0.9 100 uM/L 1mM/L 100ul 9.9 10 u M/L 10uM/L 100ul 0.9 1 uM/L 10uM/L 100ul 9.9 100 nM/L 以反应终止液为空白对照，测定这四种浓度液的荧光值，将荧光值对4-MU梯度浓度绘制标准曲线。操作步骤参看DyNA Quant200荧光测定仪的使用说明。 或者按照仪器使用说明做： 碳酸钠溶液ml 1微摩尔4-MU（ul微升） 4-MU终浓度（nM） 2.0 0 0 1.9 100 50 1.8 200 100 1.7 300 150 1.6 400 200 测定时取上述浓度溶液100ul加入1.9ml的0.2M碳酸钠混匀后测定荧光值，或者在其他荧光光度计上100ul加200ul碳酸钠混匀测定。 |
4楼2008-10-09 11:44:40
dailiang
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5楼2008-10-10 15:16:30
