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小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答中转子版 » 请杂交的高手，大侠们指点迷津 有效期至2008年10月20日
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harpman

铜虫 (小有名气)

[求助] 请杂交的高手，大侠们指点迷津 有效期至2008年10月20日

求教！杂交显色的结果整条尼龙膜都是一样的颜色，紫黑色的，最有可能是什么原因呢？有做反向线性杂交的朋友可加我，学习学习！QQ：375018322
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1楼 2008-10-08 15:42:34
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chowchangfat

铜虫 (初入文坛)
还有可能是杂交温度过低，可以提高杂交温度65-68，不过我做的一直都是42度。增加预杂交的时间1-2小时，也可降低背景。
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3楼2008-10-14 13:48:56
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chowchangfat

铜虫 (初入文坛)
你用的是地高辛的化学显色盒子吧？我觉的你的结果可能是由以下几个原因造成的：
1.你的探针浓度过高，导致背景值高。可以降低探针的浓度，一般是25ng/ml

2.杂交或洗膜的过程中，不小心让膜干燥了。在杂交的整个过程中，一定要让膜是湿润的。
3.显色的时间太长了

以上是我做southern 杂交的一点看法，不知对楼主是否有帮助。
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2楼2008-10-14 13:42:27
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