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harpman

铜虫 (小有名气)

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帖子: 93
在线: 29.8小时
虫号: 433389
注册: 2007-08-18
性别: GG
专业: 群落生态学

[求助] 请杂交的高手，大侠们指点迷津有效期至2008年10月20日

求教！杂交显色的结果整条尼龙膜都是一样的颜色，紫黑色的，最有可能是什么原因呢？有做反向线性杂交的朋友可加我，学习学习！QQ：375018322

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1楼 2008-10-08 15:42:34

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

chowchangfat

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 113.5
帖子: 25
在线: 2.9小时
虫号: 471115
注册: 2007-11-30
性别: GG
专业: 分子生物学

你用的是地高辛的化学显色盒子吧？我觉的你的结果可能是由以下几个原因造成的：
1.你的探针浓度过高，导致背景值高。可以降低探针的浓度，一般是25ng/ml

2.杂交或洗膜的过程中，不小心让膜干燥了。在杂交的整个过程中，一定要让膜是湿润的。
3.显色的时间太长了

以上是我做southern 杂交的一点看法，不知对楼主是否有帮助。