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harpman

铜虫 (小有名气)

[求助] 请杂交的高手,大侠们指点迷津 有效期至2008年10月20日

求教!杂交显色的结果整条尼龙膜都是一样的颜色,紫黑色的,最有可能是什么原因呢?有做反向线性杂交的朋友可加我,学习学习!QQ:375018322
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chowchangfat

铜虫 (初入文坛)

你用的是地高辛的化学显色盒子吧?我觉的你的结果可能是由以下几个原因造成的:
1.你的探针浓度过高,导致背景值高。可以降低探针的浓度,一般是25ng/ml

2.杂交或洗膜的过程中,不小心让膜干燥了。在杂交的整个过程中,一定要让膜是湿润的。
3.显色的时间太长了

以上是我做southern 杂交的一点看法,不知对楼主是否有帮助。
2楼2008-10-14 13:42:27
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chowchangfat

铜虫 (初入文坛)

还有可能是杂交温度过低,可以提高杂交温度65-68,不过我做的一直都是42度。增加预杂交的时间1-2小时,也可降低背景。
3楼2008-10-14 13:48:56
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