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lys6827

木虫 (著名写手)

[交流] DNA片段的熔解曲线问题

问大家一个奇怪的问题:
背景:Tm值的定义是DNA片段双螺旋结构打开到一半时候的温度
问题,那是不是就是说,如果用SYBR做实验,并做熔解曲线的话,到达Tm值的温度的话,对应的染料信号值是应该也降到总体信号值的一半?
但是实际上从熔解曲线上来看的话,是不是的,请见附件的熔解曲线图。
不知道这个怎么解释。

DNA片段的熔解曲线问题
1.jpg
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lys6827

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by oliviashane at 2016-02-04 09:56:04
溶解曲线制作过程中当解开到一半的时候,并不是荧光信号值达到最大,而是荧光信号的变化率。你所看到的是一次微分后的融解曲线结果。而原始的融解曲线是随着60℃起始升高温度的过程,双链缓慢解链,嵌入在DNA双链中 ...

我上面附的图是原始图呀。
我是想问,比如上图,原始的荧光信号在60度时是11左右,而到达Tm值(83.26)不是5.5,实际上是2左右?这是为什么?

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-02-05 05:40:48
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oliviashane

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
溶解曲线制作过程中当解开到一半的时候,并不是荧光信号值达到最大,而是荧光信号的变化率。你所看到的是一次微分后的融解曲线结果。而原始的融解曲线是随着60℃起始升高温度的过程,双链缓慢解链,嵌入在DNA双链中的SYBR Green I数量减少,荧光信号强度逐渐降低,当温度达到Tm值时,荧光信号值骤然降低,而此时的荧光信号的变化率是最大的,即对应一次微分结果的峰值。
2楼2016-02-04 09:56:04
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