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lys6827

木虫 (著名写手)

[交流] DNA片段的熔解曲线问题

问大家一个奇怪的问题：
背景：Ｔｍ值的定义是DNA片段双螺旋结构打开到一半时候的温度
问题，那是不是就是说，如果用SYBR做实验，并做熔解曲线的话，到达Tm值的温度的话，对应的染料信号值是应该也降到总体信号值的一半？
但是实际上从熔解曲线上来看的话，是不是的，请见附件的熔解曲线图。
不知道这个怎么解释。

DNA片段的熔解曲线问题
1.jpg
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1楼 2016-02-03 14:16:57
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oliviashane

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
溶解曲线制作过程中当解开到一半的时候，并不是荧光信号值达到最大，而是荧光信号的变化率。你所看到的是一次微分后的融解曲线结果。而原始的融解曲线是随着60℃起始升高温度的过程，双链缓慢解链，嵌入在DNA双链中的SYBR Green I数量减少，荧光信号强度逐渐降低，当温度达到Tm值时，荧光信号值骤然降低，而此时的荧光信号的变化率是最大的，即对应一次微分结果的峰值。
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2楼2016-02-04 09:56:04
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lys6827

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by oliviashane at 2016-02-04 09:56:04
溶解曲线制作过程中当解开到一半的时候，并不是荧光信号值达到最大，而是荧光信号的变化率。你所看到的是一次微分后的融解曲线结果。而原始的融解曲线是随着60℃起始升高温度的过程，双链缓慢解链，嵌入在DNA双链中 ...

我上面附的图是原始图呀。
我是想问，比如上图，原始的荧光信号在60度时是11左右，而到达Tm值（83.26）不是5.5，实际上是2左右？这是为什么？

发自小木虫IOS客户端
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3楼2016-02-05 05:40:48
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