应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » DNA片段的熔解曲线问题
31/1返回列表
查看: 2243  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lys6827

木虫 (著名写手)

[交流] DNA片段的熔解曲线问题

问大家一个奇怪的问题：
背景：Ｔｍ值的定义是DNA片段双螺旋结构打开到一半时候的温度
问题，那是不是就是说，如果用SYBR做实验，并做熔解曲线的话，到达Tm值的温度的话，对应的染料信号值是应该也降到总体信号值的一半？
但是实际上从熔解曲线上来看的话，是不是的，请见附件的熔解曲线图。
不知道这个怎么解释。

DNA片段的熔解曲线问题
1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-02-03 14:16:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oliviashane

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
溶解曲线制作过程中当解开到一半的时候，并不是荧光信号值达到最大，而是荧光信号的变化率。你所看到的是一次微分后的融解曲线结果。而原始的融解曲线是随着60℃起始升高温度的过程，双链缓慢解链，嵌入在DNA双链中的SYBR Green I数量减少，荧光信号强度逐渐降低，当温度达到Tm值时，荧光信号值骤然降低，而此时的荧光信号的变化率是最大的，即对应一次微分结果的峰值。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-02-04 09:56:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lys6827

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by oliviashane at 2016-02-04 09:56:04
溶解曲线制作过程中当解开到一半的时候，并不是荧光信号值达到最大，而是荧光信号的变化率。你所看到的是一次微分后的融解曲线结果。而原始的融解曲线是随着60℃起始升高温度的过程，双链缓慢解链，嵌入在DNA双链中 ...

我上面附的图是原始图呀。
我是想问，比如上图，原始的荧光信号在60度时是11左右，而到达Tm值（83.26）不是5.5，实际上是2左右？这是为什么？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-02-05 05:40:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lys6827 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭