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western blot 膜上有两坨黑色的东西，请问是什么原因造成的呢，附上图片了。
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有两个问题，1是背景很杂乱，使用的是proteintech的catalase一抗，marker都可以显出来，我用其它的一抗（比如actin等），是显不出marker的，不知道是不是这个一抗有问题。 2 膜下面的黑色的两快是什么呢？ western大神帮帮忙，小弟谢谢了！！！  Administrator 2016-01-21 23hr 14min11.jpg  Administrator 2016-01-31 14hr 09min.jpg |
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问题1：之前鉴定的28个定制抗体的小样中，有的抗体也会有marker条带出现，不过条带数量没你的那么多，清晰程度有时跟目的条带有得一比，我认为是应该抗体的特异性较差造成的，毕竟marker本身也是一种蛋白序列，也是有杂上的可能的，而且我用actin也不会有这种状况出现。（当然，你的是商业化的抗体，也许跟我的情况不一样，毕竟商业化的抗体特异性要是那么不好我也是醉了） 问题2：我也有相似的现象，不过我用的是定制抗体，而且只在原核表达蛋白中发现这种现象，在植物蛋白的泳道上就没有，所以个人当时认为是除了目的蛋白，正好这个物种里含有一些蛋白具有能和该抗体结合的表位，电泳没分开的小分子蛋白中有比较多适合与抗体结合造成的。 以上仅为个人观点，认真就输了~  |
2楼2016-02-03 13:29:17
3楼2016-02-05 19:38:55
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