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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助啊！cDNA扩增不出特异性条带！
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lixuxiao12

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jinghun2004 at 2016-02-02 10:40:52
反转cDNA前Total RNA  需要用DNase I消化一下；从电泳图看引物应当减少，另外1000bp以下目的片段延伸时间有40S就足够了 。

但是有个1075的呢？40秒也足够吗

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11楼2016-02-02 12:15:30
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jinghun2004

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by lixuxiao12 at 2016-02-02 12:15:30
但是有个1075的呢？40秒也足够吗
...

个人感觉够了，片段小点的还可以调整下时间 ，感觉设定的时间都偏长。如果有目的片段，还有比目的片段小的非特异，那就调高退火温度；如果有目的片段，还有大的非特异条带，那就缩短延伸时间试试。
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12楼2016-02-02 12:56:06
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lixuxiao12

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by jinghun2004 at 2016-02-02 12:56:06
个人感觉够了，片段小点的还可以调整下时间 ，感觉设定的时间都偏长。如果有目的片段，还有比目的片段小的非特异，那就调高退火温度；如果有目的片段，还有大的非特异条带，那就缩短延伸时间试试。...

好的！谢谢指教！我再试试哈

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13楼2016-02-02 14:09:53
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jinghun2004

铜虫 (小有名气)
恩

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14楼2016-02-02 16:46:16
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