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lixuxiao12

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助啊!cDNA扩增不出特异性条带! 已有1人参与

脾脏中提RNA,后用两步法进行特异性扩增。图最左是DL2000,之后从左往右依次的扩增条带本来应该是600多,1000多,500多。但是PCR(预变性94℃ 5min 30个循环94℃1min 55℃1min 72℃70s 之后72摄氏度7min)后电泳(2%的胶)出现很多非特异性扩增(只有600多那个出现了很浅很浅的特异性条带)。。。

1.没有出现目的条带,出现很多非特异性扩增,请问是引物的特异性问题吗?还是PCR温度的问题??
2.那个在点样孔边缘很细很亮的条带是什么啊??是不是RNA没提好导致cDNA出现了问题啊??

求助啊!cDNA扩增不出特异性条带!
2016_1_30 2016-01-30 13 时 36 分_副本.jpg
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jinghun2004

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by lixuxiao12 at 2016-02-02 12:15:30
但是有个1075的呢?40秒也足够吗
...

个人感觉够了,片段小点的还可以调整下时间 ,感觉设定的时间都偏长。如果有目的片段,还有比目的片段小的非特异,那就调高退火温度;如果有目的片段,还有大的非特异条带,那就缩短延伸时间试试。
12楼2016-02-02 12:56:06
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新欣小生

银虫 (小有名气)

时间会证明一切
2楼2016-01-31 00:19:39
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lixuxiao12

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 新欣小生 at 2016-01-31 00:19:39
跑的总RNA?

用cDNA跑的哈!
3楼2016-01-31 01:11:23
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Xie_Zijing

新虫 (初入文坛)

应该是引物的问题,建议重设引物

发自小木虫Android客户端
4楼2016-01-31 08:35:48
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