应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助啊！cDNA扩增不出特异性条带！
51/1返回列表
查看: 3235  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lixuxiao12

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助啊！cDNA扩增不出特异性条带！ 已有1人参与

脾脏中提RNA，后用两步法进行特异性扩增。图最左是DL2000，之后从左往右依次的扩增条带本来应该是600多，1000多，500多。但是PCR（预变性94℃ 5min 30个循环94℃1min 55℃1min 72℃70s 之后72摄氏度7min）后电泳（2%的胶）出现很多非特异性扩增（只有600多那个出现了很浅很浅的特异性条带）。。。

1.没有出现目的条带，出现很多非特异性扩增，请问是引物的特异性问题吗？还是PCR温度的问题？？
2.那个在点样孔边缘很细很亮的条带是什么啊？？是不是RNA没提好导致cDNA出现了问题啊？？

求助啊！cDNA扩增不出特异性条带！
2016_1_30 2016-01-30 13 时 36 分_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-01-30 23:41:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinghun2004

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lixuxiao12: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2016-02-02 12:13:58
反转cDNA前Total RNA  需要用DNase I消化一下；从电泳图看引物应当减少，另外1000bp以下目的片段延伸时间有40S就足够了 。
赞一下 回复此楼
10楼2016-02-02 10:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

新欣小生

银虫 (小有名气)
跑的总RNA？

发自小木虫Android客户端
回复此楼
时间会证明一切
2楼2016-01-31 00:19:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixuxiao12

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 新欣小生 at 2016-01-31 00:19:39
跑的总RNA？

用cDNA跑的哈！
回复此楼
3楼2016-01-31 01:11:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Xie_Zijing

新虫 (初入文坛)
应该是引物的问题，建议重设引物

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2016-01-31 08:35:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 5/250 2026-09-17 05:14 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:52 by k06BKNblrGRH
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:26 by k06BKNblrGRH
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 5/250 2026-09-17 04:14 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:04 by k06BKNblrGRH
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-17 03:38 by k06BKNblrGRH
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 8/400 2026-09-17 02:52 by Tql5LQhh5rLK
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-17 02:26 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 7/350 2026-09-17 01:52 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 18:37 by rRvxEj3zorCy
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-16 17:27 by i3KBRD19ERkG
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 17:12 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-16 17:00 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 16:00 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 15:12 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-16 14:27 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 02:35 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 申博发邮件 +4 Lmengk 2026-09-15 4/200 2026-09-16 00:05 by 木心想继续深造
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:39 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭