24小时热门版块排行榜

返回列表

8128sherry

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 256.8
帖子: 38
在线: 9.8小时
虫号: 3590291
注册: 2014-12-12
专业: 糖尿病

[求助] 新手有几个关于WESTER BLOT之前做的BUFFER的问题已有1人参与

第一个是关于RIPA BUFFER，我之前在网上看到的配方里面没有DTT，而有的有，做的时候，老师也没要求加，所以我想问下这个DTT是必须的么？查了一下之前有人回答的，答案也是五花八门。这个不加是否会对提取蛋白质造成很大影响呢？
然后是制备好了protein sample之后，老师也没有让我做离心，而是直接做protein assay (Bradford assay)。。。但是我看不管国内国外材料都写到要做离心，这个不做会有影响么？因为之前有个朋友做蛋白质提取，说也没做离心。
另外对于加蛋白酶抑制剂和磷酸抑制剂，我是直接买的罗氏那个一片片装的 ( Protease Inhibitors - Cocktail Tablets)，对于这个应该放多少在RIPA BUFFER里呢，老师是跟我说各取一片，然后加10ML RIPA buffer 溶解，就行了，我也不太清楚这个浓度怎么算。。希望有大神给指点一下。。

第二个是关于loading buffer, 也是看的网上配方说要加溴酚蓝，但是我老师也没说要加。。。这个有影响么，我知道溴酚蓝是染色的，可以看清电泳进度，那么我不加是否就看不到了呢？

主要看的实验手册和老师讲的差的有点多，也不知道会不会影响实验结果。。。有点慌张。。。