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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 自杀载体构建的问题
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bddk

金虫 (小有名气)

[求助] 自杀载体构建的问题 已有1人参与

1.构建自杀载体时，如果用抗性基因进行目的基因的缺失，上下同源臂在选择长度时是不是要满足后续基因3的倍数即密码子的倍数？
2.如果不留痕迹的缺失目标基因，即不用抗性基因置换目标基因，那上下同源臂之间的基因碱基数可以为零吗？还是只要把目标基因破坏就行，只要置换的基因比目标基因短就行？
3.革兰氏阳性菌如果要进行缺失菌株构建，一般都用什么载体，那个公司有卖的？
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1楼 2016-01-25 19:34:03
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noblefire

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、 需要考虑到下游基因的转录，因为理论上讲单敲除不能排除是因为影响下游基因造成的表型缺失。所以最好进行非极性突变，保证插入质粒转录方向不影响下游基因转录。

2、 上下同源臂是0那就不是双敲除了，就变成单交换了。不要置换，就像二楼所说，只要上下同源臂之间的序列较长，一般缺失后会造成失活，并且不影响其他基因转录。

3、 同求。
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3楼2016-01-26 08:21:03
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Ljch1121

新虫 (初入文坛)
2，只要确实目的基因的部分片段

发自小木虫Android客户端
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2楼2016-01-26 07:09:54
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