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bddk

金虫 (小有名气)

[求助] 自杀载体构建的问题 已有1人参与

1.构建自杀载体时,如果用抗性基因进行目的基因的缺失,上下同源臂在选择长度时是不是要满足后续基因3的倍数即密码子的倍数?
2.如果不留痕迹的缺失目标基因,即不用抗性基因置换目标基因,那上下同源臂之间的基因碱基数可以为零吗?还是只要把目标基因破坏就行,只要置换的基因比目标基因短就行?
3.革兰氏阳性菌如果要进行缺失菌株构建,一般都用什么载体,那个公司有卖的?
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Ljch1121

新虫 (初入文坛)

2,只要确实目的基因的部分片段

发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-26 07:09:54
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noblefire

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、 需要考虑到下游基因的转录,因为理论上讲单敲除不能排除是因为影响下游基因造成的表型缺失。所以最好进行非极性突变,保证插入质粒转录方向不影响下游基因转录。

2、 上下同源臂是0那就不是双敲除了,就变成单交换了。不要置换,就像二楼所说,只要上下同源臂之间的序列较长,一般缺失后会造成失活,并且不影响其他基因转录。

3、 同求。
3楼2016-01-26 08:21:03
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