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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白洗脱沉淀
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waiwai0105

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白洗脱沉淀 已有4人参与

各位大侠，本人刚开始用蛋白A介质做纯化，目的蛋白等电点是5.3-5.5，洗脱用的是柠檬酸缓冲液，用PH3.0、3.5、4.0洗脱时都会沉淀，不知道什么原因。该怎么办呢？？
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1楼 2016-01-25 17:21:41
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chenyyy

无虫 (正式写手)
蛋白变性 失活了

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2楼2016-01-27 19:22:01
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waiwai0105

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenyyy at 2016-01-27 19:22:01
蛋白变性 失活了

那应该怎么办呢？？
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3楼2016-01-28 08:37:40
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xfy821523052

金虫 (小有名气)

脉冲电场；食品加工

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by waiwai0105 at 2016-01-28 08:37:40
那应该怎么办呢？？

我想先问一下，放入蛋白A介质什么意思，有什么用？会不会因为你的杂蛋白在3.0，3.5，4.0沉淀出来了吧

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4楼2016-02-15 19:26:53
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MT233

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

适当调节一下PH值，或者更换缓冲液
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5楼2016-03-31 23:47:12
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

蛋白在不同缓冲液中（PH)，溶解发生变化，当然也与蛋白表达条件有关系哦
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6楼2016-04-07 14:12:17
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waiwai0105

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xfy821523052 at 2016-02-15 19:26:53
我想先问一下，放入蛋白A介质什么意思，有什么用？会不会因为你的杂蛋白在3.0，3.5，4.0沉淀出来了吧
...

蛋白加到层析柱上时，是目的蛋白沉淀了
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7楼2016-04-08 07:57:53
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waiwai0105

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by MT233 at 2016-03-31 23:47:12
适当调节一下PH值，或者更换缓冲液

我用的柠檬酸缓冲液，试了下甘氨酸，没用。还能换成什么呢？
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8楼2016-04-08 07:58:51
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waiwai0105

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hc-material at 2016-04-07 14:12:17
蛋白在不同缓冲液中（PH)，溶解发生变化，当然也与蛋白表达条件有关系哦

是因为蛋白表达时结构变化了吗？？
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9楼2016-04-08 07:59:26
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cwf2011

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
waiwai0105: 金币+20, ★有帮助 2016-05-19 09:38:50
确定沉淀的是目的蛋白么，能发下具体实验用缓冲液么

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拳拳
10楼2016-05-12 06:50:05
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