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真果粒

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR问题 已有1人参与

对大约11kb的质粒P全长，跑胶有目的条带，但很暗，但胶孔很暗。这是什么原因？求大神指导。

PCR问题
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徘徊在街头，不知何去何从。
1楼 2016-01-24 10:34:30
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tams137

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看上去拖尾，应该是目的基因讲解导致，建议跑胶用的水和药品换更高清洁度的
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2楼2016-01-27 09:19:44
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chinayanfei

木虫 (小有名气)
可能是退火温度偏低…适当高一点点或许会好点…我没看错你胶孔在上方应该很亮啊？不是暗～可以是二聚体

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3楼2016-02-19 12:10:08
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小路little

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2016-02-19 17:38:45
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真果粒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chinayanfei at 2016-02-19 12:10:08
可能是退火温度偏低…适当高一点点或许会好点…我没看错你胶孔在上方应该很亮啊？不是暗～可以是二聚体

写错了，是孔里比较亮。谢谢了

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徘徊在街头，不知何去何从。
5楼2016-02-22 12:38:12
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真果粒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chinayanfei at 2016-02-19 12:10:08
可能是退火温度偏低…适当高一点点或许会好点…我没看错你胶孔在上方应该很亮啊？不是暗～可以是二聚体

用了两步法，即退火和延伸温度都是68摄氏度。

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徘徊在街头，不知何去何从。
6楼2016-02-22 12:39:18
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fudan671

木虫 (著名写手)
拖带，建议提高pcr温度，然后多加样品，做胶回收
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7楼2016-02-24 09:46:44
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