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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » km值
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麦子果树

新虫 (小有名气)

[求助] km值 已有1人参与

求算km时，对酶液有什么具体要求。例如纯度之类的
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1楼 2016-01-22 22:56:02
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noblefire

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
计算Km值不需要酶的纯度很高，只要pH，温度，缓冲液，其他底物的浓度一定的情况下Km值是一个固定的值。但是kcat（Vmax）的计算需要知道酶的纯度。
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2楼2016-01-23 20:32:34
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麦子果树

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by noblefire at 2016-01-23 20:32:34
计算Km值不需要酶的纯度很高，只要pH，温度，缓冲液，其他底物的浓度一定的情况下Km值是一个固定的值。但是kcat（Vmax）的计算需要知道酶的纯度。

如果酶促反应过程中，酶液中含有其他影响该反应的物质，那不就不能客观反映该酶的兴致了，该怎样排除呢？
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3楼2016-01-24 16:35:54
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noblefire

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 麦子果树 at 2016-01-24 16:35:54
如果酶促反应过程中，酶液中含有其他影响该反应的物质，那不就不能客观反映该酶的兴致了，该怎样排除呢？...

不能排除，因为你无法确定细胞中你的酶的抑制剂是什么，也不知道抑制类型。所以进行纯化有必要，哪怕只是初步纯化。甚至只是通过透析去除小分子。

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4楼2016-01-24 16:40:10
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麦子果树

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by noblefire at 2016-01-24 16:40:10
不能排除，因为你无法确定细胞中你的酶的抑制剂是什么，也不知道抑制类型。所以进行纯化有必要，哪怕只是初步纯化。甚至只是通过透析去除小分子。
...

经过一定的纯化后，再计算km值时，已经默认整个反应体系是没有其他物质干扰该反应的？
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5楼2016-01-24 16:43:44
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noblefire

铁虫 (小有名气)
可以这么认为，其实不纯化可以认可。但是没法算kcat。

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6楼2016-01-24 16:46:14
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