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佛怒轮回

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot 120kd hrp-ecl 发光,无结果(一片黑,无条带)

WB 大体步骤条件
1.     1.5cm玻璃板
2.     8%分离胶
3.    电泳:浓缩胶,恒压80v.约30min;   分离胶,恒压100v,约1h.
4.     湿转:恒流300mA,  约2h。
5.    转膜结束后,TBST洗膜5次,每次3min。  BSA封闭1.5h.  TBST洗膜5次,每次3min. 一抗孵育,4℃过夜。
6.    TBST洗膜5次,每次3min. 二抗结合,室温轻摇1h.
7.    HRP-ECL(1:1)发光。
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