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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 连接转化后抽质粒酶切已经验证，可拿去测序却测不出来。为什么呀？？？
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honger982896

银虫 (初入文坛)

[交流] 连接转化后抽质粒酶切已经验证，可拿去测序却测不出来。为什么呀？？？

我连接转化后，在抗性平板上挑的单克隆酶切已经验证连接转化了进去，可测序却有很多的重叠峰，测序失败，请问是什么原因呀？？？理论上是讲不通的呀？哪位大侠知道是什么原因吗？
先谢过！！！！
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1楼 2008-10-05 12:14:31
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bluesea1026

先排除杂菌污染、非单克隆的原因，然后可以把你自己做克隆的引物送去让他用你的特异引物测序。
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4楼2008-10-06 14:58:33
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honger982896

银虫 (初入文坛)
各位有知道的帮下忙。。。。
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2楼2008-10-06 08:19:41
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sumertansy

铜虫 (小有名气)
我也遇到过类似情况，我有次测序，疏忽了，我本来做穿梭载体用大肠杆菌的复制子上的一段做为测序引物。我把中间载体（目标基因和复制子串联在大肠杆菌的载体上）送去测序，因为有两个复制子，就有两个引物结合位点，也是重峰，搞的测序公司一头雾水。
建议检查你的引物和载体
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3楼2008-10-06 08:33:45
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jinjin8803

金虫 (初入文坛)
染菌了，很多情况下就是染菌了！！！
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5楼2008-10-07 08:28:22
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