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honger982896

银虫 (初入文坛)

[交流] 连接转化后抽质粒酶切已经验证,可拿去测序却测不出来。为什么呀???

我连接转化后,在抗性平板上挑的单克隆酶切已经验证连接转化了进去,可测序却有很多的重叠峰,测序失败,请问是什么原因呀???理论上是讲不通的呀?哪位大侠知道是什么原因吗?
先谢过!!!!
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honger982896

银虫 (初入文坛)

各位有知道的帮下忙。。。。
2楼2008-10-06 08:19:41
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sumertansy

铜虫 (小有名气)

我也遇到过类似情况,我有次测序,疏忽了,我本来做穿梭载体用大肠杆菌的复制子上的一段做为测序引物。我把中间载体(目标基因和复制子串联在大肠杆菌的载体上)送去测序,因为有两个复制子,就有两个引物结合位点,也是重峰,搞的测序公司一头雾水。
建议检查你的引物和载体
3楼2008-10-06 08:33:45
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bluesea1026

先排除杂菌污染、非单克隆的原因,然后可以把你自己做克隆的引物送去让他用你的特异引物测序。
4楼2008-10-06 14:58:33
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jinjin8803

金虫 (初入文坛)

染菌了,很多情况下就是染菌了!!!
5楼2008-10-07 08:28:22
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