24小时热门版块排行榜    

查看: 3864  |  回复: 6

wwzjlq

银虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR检测攻毒后各组织的病毒含量需要设置内参吗? 已有3人参与

各位虫友:
    最近攻毒了一批动物,发病后想检测该动物各组织的病毒含量,现在已经建立了一个定量PCR方法,知道标准曲线,现在的问题是:
1.采取组织样品的时候是否要相同的量?
2.咨询了几个人说要用内参,想问下内参怎么设置以及意义?
3.查询文献没有设置特定的内参,均是用标准曲线计算,疑惑是否需要设置内参?
4.在做此类实验时候有什么要注意的事项吗?
回复此楼
向阳生长……
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pengc201

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

2楼2016-01-21 00:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

holdbio

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我读研期间也做过类似实验,没有用内参。只需要设立对照组~然后用不同组织提取的RNA以等量进行后续试验就行了
努力做好每一件事情
3楼2016-02-18 10:34:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
4楼2016-02-18 12:23:56
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

werq63

金虫 (著名写手)

5楼2016-02-18 12:26:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

内参也叫内标,是为了保证数据之间的可比性。内标的Ct值要控制在Ct31左右,内标浓度如果过高,会严重影响到目的基因的扩增。
内标:已知低含量的与模板扩增效率相似的一段DNA片段,将它加入PCR反应液中,与模板共同扩增,以反应每管真实得扩增情况如果内标和样品都未扩增出结果,则表示该管扩增无效,应重新做。
我们在提取核酸时,有时也会将内标加进去,不仅可以监控反应体系是否有效;也可以监控整个提取过程的有效性,同时实现核酸提取过程和扩增过程的监控。
6楼2016-02-19 10:07:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Zql1314

新虫 (正式写手)

看你用的是绝对定量还是相对定量,要是绝对定量貌似就不用内参

发自小木虫Android客户端
7楼2019-05-04 10:38:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wwzjlq 的主题更新
信息提示
请填处理意见