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科大小飞

铁虫 (初入文坛)

[求助] 怎么把杆状病毒Bacmid(186413bp)电转化到BW25113/pkd46 RED重组系统中??急急急!

最近一直在做基因敲除,用的是RED重组系统将杆状病毒基因组上的某个基因敲掉。所以首先得将杆状病毒的基因组先电转入到BW25113/PKD46系统中,然后再进行敲除。现在的问题是杆状病毒的基因组(186413bp)一直转化不到BW25113里。救急啊
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天道酬勤
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i760912798

木虫 (正式写手)

我也在用这个系统敲除基因,但是,设计长引物扩增重组片段同源臂,不管是普通taq酶还是高保真酶扩增,同源臂还是突变,有什方法可以避免?

发自小木虫Android客户端
3楼2016-03-24 23:27:25
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i760912798

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xuzhangxm at 2016-03-11 09:55:28
我也在做,同求

我也在敲除基因,扩增出同源臂有突变,已经重复几次还是有突变,用什么方法避免同源臂序列突变?

发自小木虫Android客户端
4楼2016-03-24 23:42:59
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