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家喻户晓

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母单杂

我现在在做酵母单杂,线性化后转化成功,也有阳性克隆,然后摸索AbA浓度,但是一直没有摸索到,想知道AbA浓度与什么有关?是与启动子长度有关?还是与诱饵载体序列的高背景有关?为什么?

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895360264

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你好,我也要做酵母单杂,可是我不会?我想请问一下,怎样把3个Bait序列连接在一起?用T4连接酶吗?
2楼2016-01-23 16:40:22
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fengshen2005

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
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家喻户晓: 金币+3 2016-01-23 22:45:58
转个空载体进去,如果背景高就是载体问题,否则就是启动子引起的。你的启动子如果含有酵母自身转录因子能够识别的序列,就会引起高背景

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3楼2016-01-23 19:02:29
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fengshen2005

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 895360264 at 2016-01-23 16:40:22
你好,我也要做酵母单杂,可是我不会?我想请问一下,怎样把3个Bait序列连接在一起?用T4连接酶吗?

合成序列时就将它重复三次

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4楼2016-01-23 19:05:00
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fengshen2005

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by fengshen2005 at 2016-01-23 19:05:00
合成序列时就将它重复三次
...

别忘了合成互补链,两侧加酶切位点,形成粘性末端

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5楼2016-01-23 19:06:50
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家喻户晓

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by fengshen2005 at 2016-01-23 19:05:00
合成序列时就将它重复三次
...

是直接送公司合成序列吗?

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6楼2016-01-24 00:19:53
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fengshen2005

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 家喻户晓 at 2016-01-24 00:19:53
是直接送公司合成序列吗?
...

对,很合成引物一样。合成两条互补的

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7楼2016-01-24 11:19:20
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