24小时热门版块排行榜    

查看: 3825  |  回复: 6

家喻户晓

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母单杂

我现在在做酵母单杂,线性化后转化成功,也有阳性克隆,然后摸索AbA浓度,但是一直没有摸索到,想知道AbA浓度与什么有关?是与启动子长度有关?还是与诱饵载体序列的高背景有关?为什么?

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

895360264

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你好,我也要做酵母单杂,可是我不会?我想请问一下,怎样把3个Bait序列连接在一起?用T4连接酶吗?
2楼2016-01-23 16:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengshen2005

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
家喻户晓: 金币+3 2016-01-23 22:45:58
转个空载体进去,如果背景高就是载体问题,否则就是启动子引起的。你的启动子如果含有酵母自身转录因子能够识别的序列,就会引起高背景

发自小木虫Android客户端
3楼2016-01-23 19:02:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengshen2005

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 895360264 at 2016-01-23 16:40:22
你好,我也要做酵母单杂,可是我不会?我想请问一下,怎样把3个Bait序列连接在一起?用T4连接酶吗?

合成序列时就将它重复三次

发自小木虫Android客户端
4楼2016-01-23 19:05:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengshen2005

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by fengshen2005 at 2016-01-23 19:05:00
合成序列时就将它重复三次
...

别忘了合成互补链,两侧加酶切位点,形成粘性末端

发自小木虫Android客户端
5楼2016-01-23 19:06:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

家喻户晓

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by fengshen2005 at 2016-01-23 19:05:00
合成序列时就将它重复三次
...

是直接送公司合成序列吗?

发自小木虫Android客户端
6楼2016-01-24 00:19:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengshen2005

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 家喻户晓 at 2016-01-24 00:19:53
是直接送公司合成序列吗?
...

对,很合成引物一样。合成两条互补的

发自小木虫Android客户端
7楼2016-01-24 11:19:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 家喻户晓 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-31 01:38 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 9/450 2026-08-31 01:16 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-31 00:56 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-31 00:42 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +5 雨打竹帘 2026-08-30 9/450 2026-08-30 22:23 by 余韵清
[基金申请] 能否申诉? +4 echo8914667 2026-08-30 5/250 2026-08-30 21:11 by echo8914667
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 3/150 2026-08-30 20:19 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 zICmwzsBXjbN 2026-08-29 5/250 2026-08-30 20:08 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 19:34 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:23 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 18:51 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 17:47 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 17:25 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 18/900 2026-08-30 16:47 by 黄鸟于飞Chao
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 14:03 by GkCVyODlx4mR
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +8 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:40 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
请填处理意见