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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 同样的条件，氰基色谱柱和C18色谱柱跑出来的差异如此大，怎么回事
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xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)

[求助] 同样的条件，氰基色谱柱和C18色谱柱跑出来的差异如此大，怎么回事 已有2人参与

各位好，本虫用hplc分析的样品中多为黄酮的葡萄糖醛酸苷类，极性相对较大，在C18色谱柱上分离时间较长，效果不理想。网上看氰基柱对大极性的化合物分离效果较好，，因此改用CN基柱分离。采用和C18相同的反相条件，跑出来的简直惨不忍睹。化合物很快就就全部被洗脱了，难不成氰基柱不能保留？求各位指导
最上面的是C18图，中间是相同洗脱条件的CN基柱图，最下面的用10%-15%乙腈洗脱的图。求指导。

同样的条件，氰基色谱柱和C18色谱柱跑出来的差异如此大，怎么回事
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1楼 2016-01-18 16:51:18
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普思生物

专家顾问 (著名写手)

中药对照品，天然产物分离纯化

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最上面的是C18图用的流动相比例是多少呢？样品出峰都在30min以后了，看起来保留挺强的啊，氰基柱和氨基柱一样，一般用于正相，也可以用于反相，而且水的比例不宜过高，你直接套用C18的液相条件肯定不合适
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2楼2016-01-18 21:08:07
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xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 普思生物 at 2016-01-18 21:08:07
最上面的是C18图用的流动相比例是多少呢？样品出峰都在30min以后了，看起来保留挺强的啊，氰基柱和氨基柱一样，一般用于正相，也可以用于反相，而且水的比例不宜过高，你直接套用C18的液相条件肯定不合适

第一个C18我是用10%的乙腈起始，最后是45%。我的化合物是葡萄糖醛酸类苷，酸性应该比较大，水相是否加酸以及加酸的种类和比例严重影响分离效果，求指导。下面的两个是用氰基柱，第一个是13%乙腈起始，第二个是10%乙腈起始，在反相上如果有机相比例太高水相太低的话东西不就直接被压出来了么。

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3楼2016-01-18 23:46:18
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普思生物

专家顾问 (著名写手)

中药对照品，天然产物分离纯化
从你这个图谱和检测波长来看，你的化合物是不是黄酮葡萄糖醛酸类的化合物，这类化合物在C18柱上吸附还是挺强的，你的主要问题不是没有保留的问题，是分离度的问题，如果乙腈分离效果不好，可以考虑下甲醇体系，或者加入些四氢呋喃，可能有时候也会改善分离度，或者把考察下酸强度和浓度，TFA这些都可以试试
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4楼2016-01-19 09:28:36
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xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 普思生物 at 2016-01-19 09:28:36
从你这个图谱和检测波长来看，你的化合物是不是黄酮葡萄糖醛酸类的化合物，这类化合物在C18柱上吸附还是挺强的，你的主要问题不是没有保留的问题，是分离度的问题，如果乙腈分离效果不好，可以考虑下甲醇体系，或者 ...

我的化合物是黄酮的葡萄糖醛酸苷类，而且在最上面的C18图上30-40min之间的两个分叉的羊角峰应该是手性化合物。如果我用纯水做流动相，成分很快就被压出来了，现在使用的是0.08%的乙酸，如图。如果用0.1%的甲酸，第一个羊角峰就合并了，不会开叉，后边的很多峰感觉也会合并，但是峰型很差。是不是流动相的酸性对黄酮的葡萄糖醛酸苷在C18上的保留影响很大啊？谢谢
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5楼2016-01-19 13:13:04
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

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1、一般情况下，极性大，C18保留是减少的。怎么能说是C18上保留很强呢？氰基柱一般是适合极性较大的化合物，但是流动相也是需要重点调整的一部分。如果C18柱，使用90%甲醇或者乙腈保留还在15min以上，才算是保留较强。
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6楼2016-01-19 14:46:20
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普思生物

专家顾问 (著名写手)

中药对照品，天然产物分离纯化
引用回帖:
5楼: Originally posted by xujingyuanxu at 2016-01-19 13:13:04
我的化合物是黄酮的葡萄糖醛酸苷类，而且在最上面的C18图上30-40min之间的两个分叉的羊角峰应该是手性化合物。如果我用纯水做流动相，成分很快就被压出来了，现在使用的是0.08%的乙酸，如图。如果用0.1%的甲酸，第 ...

黄酮的葡萄糖醛酸苷类,肯定都是属于手性化合物啊，黄酮类本来就是带弱酸性的，加入酸会抑制黄酮在流动相的电离，减少拖尾，提高分离度，你这个样品好像跟酸度有关系，你试试磷酸或者三氟乙酸，一般浓度用到0.1%
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7楼2016-01-19 14:55:33
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xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 普思生物 at 2016-01-19 14:55:33
黄酮的葡萄糖醛酸苷类,肯定都是属于手性化合物啊，黄酮类本来就是带弱酸性的，加入酸会抑制黄酮在流动相的电离，减少拖尾，提高分离度，你这个样品好像跟酸度有关系，你试试磷酸或者三氟乙酸，一般浓度用到0.1%...

谢谢，我试试。还望多多指教

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8楼2016-01-19 23:58:53
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