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hekan0825

新虫 (初入文坛)

[求助] 紧急求助!!!蛋白凝胶的SDS-PAGE。 已有2人参与

朋友们,我做蛋白凝胶的SDS-PAGE,可是做了两次都跑不出来。。。

第一次是把0.3g样品容到15mL尿缓冲液(内含20mM Tris, 8M 尿素,2%SDS和2%β-巯基乙醇,pH=8),匀浆(10000r/min,5min),然后煮沸2min,室温下摇荡12h,然后用10%的分离胶和3%的浓缩胶。可能是浓度太低,没有跑出来。
第二次把1g样品容到10ml尿缓冲液 里,可是还是没跑出来,堵住了上样口。

我分析了失败的三种可能原因:
一是前处理方法不对;
二是尿缓冲液配制方法不对,我是将所有东西都称量好后再定容。pH有8.7多。。。
三是浓度不对。

请高手指点。金币虽少,但已倾囊。
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fudan671

木虫 (著名写手)

★
hekan0825(sytucom代发): 金币+1, 感谢应助,希望继续关注楼主回复,谢谢 2016-02-23 21:54:17
你初始的配胶怎么样?然后电压80跑2个小时。正常加样。

发自小木虫Android客户端
3楼2016-02-13 09:31:31
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cheng0302

新虫 (初入文坛)

★
hekan0825(sytucom代发): 金币+1, 感谢应助,希望继续关注楼主回复,谢谢 2016-02-23 21:54:08
电压多大?电压调大试试

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-01-23 14:35:28
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蛋蛋是颗蛋啊

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

能否提供百分3浓缩胶的配方?
4楼2016-09-18 10:47:30
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阿狸_123

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

溶液中蛋白质浓度应该在0.2%到0.5%合适的
5楼2016-09-21 15:21:59
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