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牧野小桃

新虫 (小有名气)

[求助] 利用CRISPR/Cas9技术敲除拟南芥某一功能未知的基因,流程是怎样的?急求!!!! 已有2人参与

利用CRISPR/Cas9技术敲除拟南芥某一功能未知的基因,流程是怎样的?急求!!!!
就是这个问题,
还有一个可以将目的基因整合进去?基本过程又是什么?
希望大神帮忙啊,
不要给推荐文献了,直接说一下过程吧,谢啦,明天下午就考试了呢。。
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牧野小桃

新虫 (小有名气)

着急啊、、
2楼2016-01-17 16:49:05
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2016-02-27 16:38:56
具体到这个生物我是不知道了 我说一下我们在人体细胞里用的吧 设计gRNA 和Cas9 一起通过逆转录进入细胞里 gRNA会和Cas9一起 在目的基因附近将双链切断 通过细胞的NHEJ (非同源末端链接)会导入碱基对增加或者减少 造成随机变异 就达到敲除的作用了。

所以主要流程就是设计gRNA 然后和Cas9 一起转染到细胞里 基本上没有什么特别复杂的步骤 只是说gRNA设计软件也有其局限性 一般选取前几位的 然后通过实际敲除效果来看到底选哪个比较好。
3楼2016-01-18 05:10:44
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baobingxiang

新虫 (初入文坛)

感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-02-27 16:39:17
同求操作,和设计过程,怎么设计引物啊
4楼2016-01-19 12:14:45
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日子有风

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by baobingxiang at 2016-01-19 12:14:45
同求操作,和设计过程,怎么设计引物啊

用CRISPR-P设计sgRNA
坚持到底,超越自我!
5楼2016-02-27 15:58:49
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fudan671

木虫 (著名写手)

6楼2016-02-27 18:52:13
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