| 查看: 3456 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
siyuansing银虫 (小有名气)
|
[求助]
酶切问题 已有2人参与
|
|
|
T载体插入了500bp的片段，T载体是takara的pMD19（simple）2692bp，无酶切位点，目的基因两段构建有EcoR I和Xba I两个酶切位点。单酶切没有效果，双酶切表现出了单酶切的效果。如图，从左向右分别是：1000marker，质粒跑胶结果，双酶切效果，EcoR I单酶切，Xba I单酶切；最右是5000的maker。 双酶切体系试过两个，效果都如同图中一样： EcoR I：1μl EcoR I：1μl Xba I：1μl Xba I：1μl x10 M buffer：2μl x10 M buffer：2μl BSA：2μl DNA（300ng/μl）：3μl DNA（300ng/μl）：3μl DEPC水：16μl DEPC水：13μl 酶都是takara的限制性内切酶，酶切条件都是37℃，12h。 EcoR I的酶切体系为： EcoR I：1μl x10 H buffer：2μl DEPC水：17μl Xba I的酶切体系为： Xba I：1μl x10 M buffer：2μl BSA：2μl DEPC水：15μl 单酶切体系都是根据说明书上配的，双酶切体系是根据说明书中双酶切反应使用表配的。 搞不懂为什么单酶切没有效果，双酶切却只表现出了单酶切的效果。另外，质粒总大小应该是3100bp左右，没有切开的质粒会跑出两条带么？而且跑胶结果的大小远大于3100bp。 请大家帮忙解惑，谢谢大家了。  PC 2016-01-16 14 时 21 分副本.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有264人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有3人回复
siyuansing
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 296.3
- 散金: 10
- 帖子: 67
- 在线: 14.6小时
- 虫号: 2399997
- 注册: 2013-04-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
送红花一朵 
10楼2016-01-23 09:33:24
2楼2016-01-16 15:22:50
3楼2016-01-16 15:25:22
sonny
金虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 12226.4
- 散金: 25
- 红花: 21
- 帖子: 1225
- 在线: 42.2小时
- 虫号: 518771
- 注册: 2008-03-05
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
siyuansing: 回帖置顶 2016-01-17 12:49:44
|
XbaI受dam甲基化影响严重，我记得识别序列为TCTAGA，如果酶切位点前面为GA或者后面为TC，就肯定切不开！ECORI我不太记得了，好好看看！都是常用酶，一般是因为疏忽了这种问题导致的！ 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4楼2016-01-16 15:38:37
10