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ytianchina8391

金虫 (正式写手)

[求助] 请教关于两条互补单链DNA分子杂交及杂交温度的问题 已有1人参与

本人想使两条互补DNA单链DNA分子杂交合成双链DNA分子,但是不知道杂交温度如何确定。在网上看到了一些信息,有的说在比Tm温度低15度下可以使其杂交,也有的说把两条单链分子混合后,加热到90多度,然后冷却至室温就能够使其杂交成为双链DNA分子,还有的直接就是在室温下混合一段时间就可以了。不知道哪种说法可行,想请专业人士帮我分析一下。
另外,我还有一个疑问,90多度这样的高温,通常不是用来是双链DNA分子分解成为单链的温度吗,为什么可以用来合成双链呢?DNA双链分子分解成单链的温度怎么确定呢?

问题比较多,因为本人不是生物相关专业的,可能问题描述的也不一定专业,所以请大牛们给点意见。多谢了!
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我的大大卷

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果没有二级结构是很容易杂交的,室温或者37度就可以杂交上,如果有二级结构,不容易杂交,那么需要95度退火5min,消除二级结构,再冷却到室温
5楼2016-12-26 15:39:09
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小鱼儿爱你啦

新虫 (小有名气)

2楼2016-03-24 10:23:33
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15031262071

新虫 (初入文坛)

我也有这个问题,请问你到现在解决了吗
3楼2016-03-29 20:41:48
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chenj-315

银虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-12 22:32:02
90度是为了让两条链变性成单链,消除二聚体,然后自然冷却至室温即可

发自小木虫Android客户端
4楼2016-08-12 21:41:20
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