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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用的clontech RACE试剂盒，做不出来结果。跪求大家看看是我设计的引物有问题吗？
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丝竹睛明

新虫 (小有名气)
建议用试剂盒获得racecdna就可以了，其他的用普通pcr条件做巢式pcr。而且3race也没必要用试剂盒的。

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11楼2016-01-15 20:05:46
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dushangyun

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知道你现在做出来没，我现在一直做，可是每次出来的条带很漂亮，测序的结果是非特异性的条带，所以很头疼，希望可以一起交流交流
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经不住逝水流年，逃不过此间少年
12楼2016-01-18 10:34:20
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Harper_sun

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 张胜博 at 2016-01-15 18:33:03
买的就是全套的CLONTECH的，这个效果比takara的好我都做不出来。用takara更做不出来了，新手一枚。...

一般不会是引物设计的问题，如果你的第一链cDNA反转的没有问题，用Clontech的试剂盒很容易扩出来的。。给张你的PCR电泳图看看，是完全没有条带还是说你条带回收了，连接转化后测序是错误序列？？如果TouchdownPCR没有条带可以试试最后一步降低退火到65度。。试剂盒的说明书里有详细说明。

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13楼2016-01-18 17:35:04
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renyi2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 张胜博 at 2016-01-15 18:33:03
买的就是全套的CLONTECH的，这个效果比takara的好我都做不出来。用takara更做不出来了，新手一枚。...

我也刚买了这个试剂盒，七千多。。。试剂盒带的引物退火温度多少啊，貌似要设计的引物和试剂盒的差不多

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14楼2016-02-24 12:18:50
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renyi2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by dushangyun at 2016-01-18 10:34:20
不知道你现在做出来没，我现在一直做，可是每次出来的条带很漂亮，测序的结果是非特异性的条带，所以很头疼，希望可以一起交流交流

同求交流

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15楼2016-02-24 12:19:39
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renyi2015

新虫 (小有名气)
同问，我做了一次，完全没条带啊，求交流

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16楼2016-03-12 00:05:41
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丝竹睛明

新虫 (小有名气)
做race，至少3不需要试剂盒，5的话也可以不用试剂盒。需要的话私信我。

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17楼2016-03-12 08:47:40
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以做race技术服务

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18楼2016-03-12 09:42:15
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renyi2015

新虫 (小有名气)
你好3'引物不应该和cdna序列一致吗？你这个是吗

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19楼2016-03-12 12:53:31
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prthefu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

首先，我也是新手，刚做这方面。所以针对你的问题，我只是单纯发表一下我自己的理解。
你贴出了基因的部分序列，一般默认方向为5-3，所以，我在你这段序列（656bp）中先查找ORF,但是，得到的结果如下图1.我找到的是后面的终止密码子，但前面的起始密码子没有，所以，你要做的不应该是5'-race吗？为什么你要做3呢？
用的clontech RACE试剂盒，做不出来结果。跪求大家看看是我设计的引物有问题吗？
图1阅读框查找.jpg
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
20楼2016-04-09 21:26:34
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