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丝竹睛明

新虫 (小有名气)

建议用试剂盒获得racecdna就可以了,其他的用普通pcr条件做巢式pcr。而且3race也没必要用试剂盒的。

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11楼2016-01-15 20:05:46
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dushangyun

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知道你现在做出来没,我现在一直做,可是每次出来的条带很漂亮,测序的结果是非特异性的条带,所以很头疼,希望可以一起交流交流
经不住逝水流年,逃不过此间少年
12楼2016-01-18 10:34:20
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Harper_sun

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 张胜博 at 2016-01-15 18:33:03
买的就是全套的CLONTECH的,这个效果比takara的好我都做不出来。用takara更做不出来了,新手一枚。...

一般不会是引物设计的问题,如果你的第一链cDNA反转的没有问题,用Clontech的试剂盒很容易扩出来的。。给张你的PCR电泳图看看,是完全没有条带还是说你条带回收了,连接转化后测序是错误序列??如果TouchdownPCR没有条带可以试试最后一步降低退火到65度。。试剂盒的说明书里有详细说明。

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13楼2016-01-18 17:35:04
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renyi2015

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 张胜博 at 2016-01-15 18:33:03
买的就是全套的CLONTECH的,这个效果比takara的好我都做不出来。用takara更做不出来了,新手一枚。...

我也刚买了这个试剂盒,七千多。。。试剂盒带的引物退火温度多少啊,貌似要设计的引物和试剂盒的差不多

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14楼2016-02-24 12:18:50
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renyi2015

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by dushangyun at 2016-01-18 10:34:20
不知道你现在做出来没,我现在一直做,可是每次出来的条带很漂亮,测序的结果是非特异性的条带,所以很头疼,希望可以一起交流交流

同求交流

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15楼2016-02-24 12:19:39
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renyi2015

新虫 (小有名气)

同问,我做了一次,完全没条带啊,求交流

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16楼2016-03-12 00:05:41
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丝竹睛明

新虫 (小有名气)

做race,至少3不需要试剂盒,5的话也可以不用试剂盒。需要的话私信我。

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17楼2016-03-12 08:47:40
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star013

新虫 (知名作家)


18楼2016-03-12 09:42:15
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renyi2015

新虫 (小有名气)

你好3'引物不应该和cdna序列一致吗?你这个是吗

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19楼2016-03-12 12:53:31
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prthefu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

首先,我也是新手,刚做这方面。所以针对你的问题,我只是单纯发表一下我自己的理解。
你贴出了基因的部分序列,一般默认方向为5-3,所以,我在你这段序列(656bp)中先查找ORF,但是,得到的结果如下图1.我找到的是后面的终止密码子,但前面的起始密码子没有,所以,你要做的不应该是5'-race吗?为什么你要做3呢?
用的clontech RACE试剂盒,做不出来结果。跪求大家看看是我设计的引物有问题吗?
图1阅读框查找.jpg

nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
20楼2016-04-09 21:26:34
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