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添加IIs型酶切位点的引物怎样设计？
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求助各位大神，我有一段3500bp的片段，想分成两段连接到载体上，但中间没有合适的酶切位点，所以想添加IIS型内切酶BsaI的酶切位点在片段外切割，但是我看到其切割位置是N，NNNN，那么请问我要怎样设计正向和反向引物？是否需要在自己的序列和酶切位点之间添加一个碱基用来切除掉？ 第一个片段的反向引物为：C GGTCTC AGGAGAAACTAGCTTCTTAAAACCAGCCTGTAATCTACTAACACC 那么第二个片段的正向的引物应该是什么呢？ |
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