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angelyou

铁虫 (小有名气)

[交流] mix可以扩出来的Taq酶扩不出来 已有4人参与

最近用特异性引物做PCR检测,结果发现同样的PCR条件,同样的模板和引物,
用擎科的2×MIX(蓝色的)能扩出来目的大小的条带,但是同时阴性对照(水做模板)也在目的大小处有弱弱的条带(已经换过新的mix)。
用takara的rTaq酶,却啥都扩不出来了,阳性对照也没条带,用Taq降低了退火温度又发现杂带很多。

大神们,这样的情况该如何解决,让阴性扩不出来阳性扩得出来且没有杂带~~~~
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反应链

新虫 (正式写手)


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The specific primers might contaminant DNA template in traces. Therefore, you should use fresh primers.

You can use touchdown PCR for increased specificity and sensitivity in PCR amplificaiton.

mix可以扩出来的Taq酶扩不出来

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2楼2016-01-12 09:21:59
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txing

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是不是没有加Mg离子
3楼2016-01-12 17:01:18
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
塔卡拉的rTaq酶好像有一种的只需要加引物,模板,水
还有一种要加别的东西,要看清楚产品货号
4楼2016-01-12 21:23:06
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angelyou

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by txing at 2016-01-12 17:01:18
是不是没有加Mg离子

不会的 ,平时扩其他引物都可以扩出来的
5楼2016-01-12 22:33:48
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angelyou

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 凯伦爱佳佳 at 2016-01-12 21:23:06
塔卡拉的rTaq酶好像有一种的只需要加引物,模板,水
还有一种要加别的东西,要看清楚产品货号

扩增加的东西肯定没问题,平时其他什么都可以扩出来的,可就最近比较纠结
6楼2016-01-12 22:34:21
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石磊1234vera

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以试试调整一下退火温度,让退过温度提高一些。

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-01-12 23:04:37
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