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里里外外

新虫 (小有名气)

[求助] T4DNA连接酶 已有1人参与

T4 DNA ligase的最佳反应温度是16℃,可以连过夜,那么酶的作用时间大约为多长呢?反应体系放置几天后最初起作用连接酶也会失活吗?从而体系就没被连接上吗?请各位多多指教!!谢谢!!!
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
里里外外: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-03-29 11:51:45
一般的酶制剂是会有一定活力上限的,通常负二十冻存可以保持活力,T4连接酶的使用,现在都有很多优化条件,比如我们现在用的22°连接,一般两小时,急得话半小时的也有用过,因为连接效率的问题关键在于片段和载体的处理上;另外关于时间后面的问题,T4 连接酶连接体系放久了,已连接的正常情况下是不会再被切开的,况且酶活力的体现和你连接体系的片段浓度也是有关的,就好像人就那么大力,你给他很少工作,他可以按时按量完成,超过他的能力后,可能那些多出来的工作他就没法完成,但是能力范围内的还是可以的

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-01-10 22:18:52
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evil丶zero

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-01-10 22:18:52
一般的酶制剂是会有一定活力上限的,通常负二十冻存可以保持活力,T4连接酶的使用,现在都有很多优化条件,比如我们现在用的22°连接,一般两小时,急得话半小时的也有用过,因为连接效率的问题关键在于片段和载体的 ...

问一下你用的是哪一家的T4连接酶酶啊?
3楼2016-01-20 19:07:37
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里里外外

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by evil丶zero at 2016-01-20 19:07:37
问一下你用的是哪一家的T4连接酶酶啊?...

生工的
4楼2016-03-29 11:52:20
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廉翔

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-01-10 22:18:52
一般的酶制剂是会有一定活力上限的,通常负二十冻存可以保持活力,T4连接酶的使用,现在都有很多优化条件,比如我们现在用的22°连接,一般两小时,急得话半小时的也有用过,因为连接效率的问题关键在于片段和载体的 ...

你好,想请教一下你用生工的T4,一般是做多少微升的反应体系,有计算成环率吗?
5楼2016-12-01 11:05:00
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