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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 资料求助 » HPLC 出峰时间延迟
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wang45695

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC 出峰时间延迟 已有2人参与

在用HPLC测定人血白蛋白含量时，用TSKG３０００　SWｘｌ　色谱柱，新柱子小分子药物在６０分钟左右出峰，柱子用久了却延迟到８０分钟（运行时间８０ｍｉｎ），会残留到下一针，请问除了换新柱子外还有别的什么方法能让小分子药物在运行时间结束前出峰？

HPLC 出峰时间延迟
IMG_20160106_150704-1.jpg


HPLC 出峰时间延迟-1
IMG_20160106_150720-1.jpg
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1楼 2016-01-06 21:38:21
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jiangrg1

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wang45695: 金币+5, ★有帮助 2016-01-07 09:39:25
四种方法:1.增加流速，比如由1.0增至1.2；2.改变流动相比例，比如适当增加有机相的比例；3.梯度洗脱，在20min后逐浙增加有机相比倒；4.换一根短的色谱柱

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2楼2016-01-06 21:53:53
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wang45695

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiangrg1 at 2016-01-06 21:53:53
四种方法:1.增加流速，比如由1.0增至1.2；2.改变流动相比例，比如适当增加有机相的比例；3.梯度洗脱，在20min后逐浙增加有机相比倒；4.换一根短的色谱柱

感谢回答！
用到的色谱柱是凝胶柱，流速方法规定是0.5ml/min，流动相是0.1M磷酸氢二钾（PH7.0），因此无法梯度洗脱或改变流动相比例。
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3楼2016-01-07 08:06:05
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wang45695: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-01-07 09:39:36
影响保留时间的因素：柱温、流速、pH、流动相组分变化、色谱柱键合相流失

柱子用久了，与系统方法学关系应该不大，估计就是键合相流失流失所致，需更新新色谱柱。

另外可考虑增加预柱，增加色谱柱寿命。
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守候在风中的宁静。
4楼2016-01-07 09:33:49
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wang45695

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2016-01-07 09:33:49
影响保留时间的因素：柱温、流速、pH、流动相组分变化、色谱柱键合相流失

柱子用久了，与系统方法学关系应该不大，估计就是键合相流失流失所致，需更新新色谱柱。

另外可考虑增加预柱，增加色谱柱寿命。

谢谢，配有预柱的，先换预柱试试
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5楼2016-01-07 09:36:32
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by wang45695 at 2016-01-07 09:36:32
谢谢，配有预柱的，先换预柱试试...

色谱柱键合相已经流失流失，更换预柱（柱芯），没用。
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守候在风中的宁静。
6楼2016-01-07 09:46:31
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wang45695

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2016-01-07 09:46:31
色谱柱键合相已经流失流失，更换预柱（柱芯），没用。...

我记得之前是拿新的预柱试旧色谱柱，色谱图的峰行变宽且不对称，峰高又低，那是色谱柱完全报废了，听您这样一说，看来还是柱子本身的问题！
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7楼2016-01-07 11:01:31
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