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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 电转后的质粒明显变小是怎么回事？
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足下客

木虫 (正式写手)

[交流] 电转后的质粒明显变小是怎么回事？

我构建了一个大小约5.4kb的质粒，电激转化入了我们实验室保藏的一株菌中，结果抽提质粒后再跑电泳，发现质粒明显变小了。但是确实是转进去了。
因为我构建质粒时用了这株菌内生性质粒上的两个基因，师姐说可能是发生了基因的双交换。但是这个内生性质粒的拷贝数是极低的，小量抽提质粒，跑电泳甚至看不到条带。
请教各位高手，出现这种情况还有没有其他原因？
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1楼 2008-09-28 11:35:27
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yelitao1983

银虫 (小有名气)
你的情况可能有两种：一种是电转时电机杯没洗干净，被其他质粒污染了。一种是你的菌株有问题！确实发生了基因的双交换，不知你用的是什么菌株，什么质粒。我构建过一个4.8kb的质粒，提出来后变成了2KB,后来酶切鉴定是染了T载体杂质粒。为了解决这个问题你可以手工中提一下质粒，多找几个酶切位点鉴定一下，是假的我想一定能鉴定出来。
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9楼2008-11-04 10:28:25
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sumertansy

铜虫 (小有名气)
用原来质粒上的酶切位点鉴定下，
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2楼2008-09-28 11:38:37
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
最简单的方法 做个菌液pcr鉴定一下
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3楼2008-09-28 11:45:50
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足下客

木虫 (正式写手)
无法进行双酶切鉴定，这个菌的质粒非常难抽提，离心时上清液中总是有悬浮物，抽提后跑电泳的条带都很浅。所以酶切过后就看不到东西了。
菌液PCR本身结果就不清楚，也不适用于我这株菌。
我现在就是想分析一下质粒变小的原因，除了与内生性质粒发生了基因的双交换之外，还有哪些可能。PS：这个质粒转入大肠杆菌中是能够稳定的复制的，而且抽提后的效果也非常好
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4楼2008-09-28 12:23:41
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