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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于构建LncRNA真核表达质粒的问题
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ietey

新虫 (小有名气)

[交流] 关于构建LncRNA真核表达质粒的问题

小弟最近想构建LncRNA真核表达载体，但是有一个问题困扰了我很长时间，一直得不到解答，还请各位有经验的虫友能够伸出援手
LncRNA的特点是只转录不翻译，那么我在构建过表达载体的时候理论上也应该遵循这一原则对吧。可问题是，凭借之前的经验，例如，我们想构建某个基因的表达载体的话，只需要将其CDS区插入到表达载体的MCS区即可。那么问题就来了，实践中，很多LncRNA的前端序列是可以找到，甚至是富含ATG的，在将LncRNA插入到MCS区的时候，其结果可能就在被转录出来之后，随即就像插入某个普通基因的CDS区一样表达出某种未知蛋白。
不知道各位虫友有没有想过这些问题，还请指教
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1楼 2016-01-05 10:35:04
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siriusxuan

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
ietey: 金币+10 2016-01-05 11:36:12
??????????????????У?????LncRNA????????????????????????а?????
???????????????????????????????ATG??????з?????????к????嶨λ???У???????Ч????????
???????????????????????????????????????????????????
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
2楼2016-01-05 10:45:16
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剑走偏锋
666

发自小木虫Android客户端
3楼2016-01-05 10:56:38
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
ietey: 金币+10 2016-01-05 11:36:06
只要有ATG就能进行翻译的，还要有核糖体定位序列，否则翻译效率是很低的
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4楼2016-01-05 11:14:26
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ietey

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by siriusxuan at 2016-01-05 10:45:16
一般应该是克隆出前体序列，就是LncRNA两端的部分也要加上，可能对剪切有帮助。
翻译问题不是很清楚，但是，并不是只要有ATG就能进行翻译的，还要有核糖体定位序列，否则翻译效率是很低的。
我记得有质粒只进行转 ...

一般的表达质粒都允许直接将目的基因的CDS区插入进去进行过表达，我认为应该在载体的转录起始位点后面就有所谓的加帽信号和核糖体定位序列吧。
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5楼2016-01-05 11:39:19
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ietey

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhenwuhuang at 2016-01-05 11:14:26
只要有ATG就能进行翻译的，还要有核糖体定位序列，否则翻译效率是很低的

一般的表达质粒都允许直接将目的基因的CDS区插入进去进行过表达，我认为应该在载体的转录起始位点后面就有所谓的加帽信号和核糖体定位序列吧。
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6楼2016-01-05 11:40:00
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siriusxuan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
对，启动子后面真核生物为KOZARK序列，原核生物为SD序列，都与核糖体RNA互补。
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
7楼2016-01-05 16:41:25
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