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pmay

金虫 (初入文坛)

[交流] 求助:高温可以使RNA降解吗?

我在提取RNA的时候使用了蛋白酶K,灭活蛋白酶的时候是用开水的,同样的材料没有加蛋白酶的时候提的很好,但是加了蛋白酶之后反而降解很严重,另外我从网上看到,蛋白酶有灭活RNA酶的作用,我想来想去,会不会在灭活蛋白酶的时候把RNA给降了阿?请高手指点一下~~
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


pmay(金币+1,VIP+0):谢谢
沸水浴加热会使RNA降解的
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
2楼2008-09-28 08:49:02
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bbcaaa888

铁虫 (小有名气)


pmay(金币+1,VIP+0):谢谢
理论上提RNA大多不用蛋白酶K,因为异硫氰酸胍完全能抑制RNA酶的作用,如果你加的蛋白酶k量不多,RNA酶不能完全降解消化,而RNA酶又耐高温,高温灭活蛋白酶k完全可能导致未被消化的RNA酶降解RNA。

[ Last edited by bbcaaa888 on 2008-9-28 at 17:12 ]
3楼2008-09-28 13:59:37
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pmay

金虫 (初入文坛)

我主要是想提FAA固定液中的材料,想知道我固定的材料里面的RNA有没有降,后面要做组织原位杂交。没有加蛋白酶K一点也提不出来,加了提出来的却是降解的,我这两天又提了,没有高温灭活蛋白酶K,结果还是降解的,真的不知道怎么办了。。。
4楼2008-09-28 22:47:56
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

是不是FAA固定液中有RNase啊?
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
5楼2008-09-29 08:45:05
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