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微笑漩涡

新虫 (著名写手)

[交流] 电转化问题

分子克隆手册上电转化时候的参数设置是2.5kv,25uF,200欧姆。

我师兄在做的时候一般设置是1.2kv,25uF,400欧姆.

请问着两组参数那个较好?它们对转化效率有什么影响 ?
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bluesea1026

补充一下,5.00ms是比较理想的电转时间,只要杯子处理干净,感受态制作干净,根据以上条件设置,得出5ms的时间是正常的,转化效率也比较理想,不要低于4.96ms。
4楼2008-09-27 15:16:00
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sumertansy

铜虫 (小有名气)


司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-18 08:25
看具体的情况了。菌种不同,转化条件不同。通常大肠杆菌DH5a的转化,0.2cm的电转杯用2.5kv,实际1.25kv/cm。枯草芽孢也是相似的条件。地衣的电压就小了多了。还有一个参数就是电击时间,一般5ms。
2楼2008-09-27 11:50:29
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bluesea1026


司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-18 08:25
我们以前有摸过条件,最终还是按照2.5kv,25uF,200欧姆。
但是还有一些参数更重要:感受态体积,菌浓度,DNA用量。
如果是克隆都没关系,长了就行,但是如果是构建文库,就还要细化一下这些参数。
3楼2008-09-27 15:14:22
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