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新虫 (著名写手)

[交流] 电转化问题

分子克隆手册上电转化时候的参数设置是2.5kv，25uF，200欧姆。

我师兄在做的时候一般设置是1.2kv，25uF，400欧姆.

请问着两组参数那个较好？它们对转化效率有什么影响？

1楼 2008-09-27 08:40:10

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铜虫 (小有名气)

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司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-18 08:25

看具体的情况了。菌种不同，转化条件不同。通常大肠杆菌DH5a的转化，0.2cm的电转杯用2.5kv，实际1.25kv/cm。枯草芽孢也是相似的条件。地衣的电压就小了多了。还有一个参数就是电击时间，一般5ms。

2楼2008-09-27 11:50:29

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司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-18 08:25

我们以前有摸过条件，最终还是按照2.5kv，25uF，200欧姆。
但是还有一些参数更重要：感受态体积，菌浓度，DNA用量。
如果是克隆都没关系，长了就行，但是如果是构建文库，就还要细化一下这些参数。

3楼2008-09-27 15:14:22

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补充一下，5.00ms是比较理想的电转时间，只要杯子处理干净，感受态制作干净，根据以上条件设置，得出5ms的时间是正常的，转化效率也比较理想，不要低于4.96ms。

4楼2008-09-27 15:16:00

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