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十月啊

新虫 (初入文坛)

[求助] 没有经过限制酶切的质粒DNA电泳后出现明显片段带，为什么会出现这种情况呢？ 已有1人参与

图上分别是经过酶切和没有经过酶切的质粒DNA电泳后的条带，第一条是marker，接着marker往右的两条是酶切过的，再往右两条是没有酶切的。没有酶切的不是应该就是环状DNA吗，就算有断裂也不会有这么刚好都形成一个长度的啊，还有为什么会拖尾呢；还有就是用同一种限制酶做的切割，为什么得到的片段会不一样呢?求帮忙分析一下，谢谢！
限制酶切割的实验和电泳的实验中间隔了一周的时间

没有经过限制酶切的质粒DNA电泳后出现明显片段带，为什么会出现这种情况呢？
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1楼 2015-12-30 01:25:40
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匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
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2楼2015-12-30 01:40:27
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liuxinyueer

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.点样空很亮，杂质明显
2.普通质粒在琼脂糖凝胶电泳会出现三条条带，电泳速度从大到小分别是：超螺旋质粒、线性质粒、开环质粒
3.酶切时间和电泳时间并非同一天，酶若没失活（加loading buffer or 热失活）很可能出现star activity
4.若第二泳道和第三泳道为同一样品，灌胶前并没有混匀，或者跑胶时胶没放平，或者电泳槽中有不均一杂质干扰电泳
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欢迎讨论，小木虫未能及时回复，请邮箱: lmzhang1994@gmail.com
3楼2015-12-30 07:22:17
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十月啊

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by becklittle at 2015-12-30 01:40:27
这4个是同一个质粒？

是的

发自小木虫IOS客户端
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4楼2015-12-30 10:43:33
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