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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR怎么也P不出目的基因的长度
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yubaihui01

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR怎么也P不出目的基因的长度 已有2人参与

怎么P一段下游同源臂，前前后后设计过长度为500、1000，1200，结果P出来的长度都只有500左右，（中间没有我设计的酶切位点）

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1楼 2015-12-29 17:04:57
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先分析一下你的序列是不是有同源性高的序列，然后再看看设计的引物是不是和扩增的序列相符，比如设计的时候引物恰后在两段同源的部分都有。
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2楼2015-12-29 17:12:25
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yubaihui01

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a13515517892 at 2015-12-29 17:12:25
先分析一下你的序列是不是有同源性高的序列，然后再看看设计的引物是不是和扩增的序列相符，比如设计的时候引物恰后在两段同源的部分都有。

不太懂，能详细说一下吗T^T

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3楼2015-12-30 22:48:17
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)
去BLAST一下

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4楼2015-12-31 08:51:13
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yubaihui01 at 2015-12-30 22:48:17
不太懂，能详细说一下吗T^T
...

就是Blast一下你的引物序列是不是和扩增的目标序列有同源或者错配。
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5楼2015-12-31 08:59:04
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20084787

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
序列测序后比较一下，有时同源性不一定那么高
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努力奋斗吧，人生会更精彩…
6楼2015-12-31 15:07:13
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