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stonegold

至尊木虫 (知名作家)

铁杆木虫

[求助] 共聚焦显微镜中纳米材料的荧光标记问题? 已有2人参与

本人合成了一个聚丙烯酸-磷酸钙的复合纳米粒子,并作为基因载体进行基因转染。投稿时,审稿人要求给出共聚焦显微镜的照片,要求纳米粒子和DNA都要用荧光标记,DNA荧光标记的可以买到,可是纳米粒子怎么荧光标记,请各位大侠给点建议。急,先谢谢各位了。
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liuanan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
markar: 金币+2, 鼓励一下! 2015-12-30 14:43:08
stonegold: 金币+50 2015-12-31 08:49:24
你的纳米材料上有很多羧基,用带氨基的染料分子通过EDC,NHS修饰。选用的染料分子与DNA标记的染料分子不要在同一个波段。
2楼2015-12-30 03:13:38
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yifeng1206

铁杆木虫 (著名写手)

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感谢参与,应助指数 +1
markar: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励一下! 2015-12-30 14:43:18
赞同楼上所说的,在高分子材料上面修饰上荧光分子,比如这个 Cyanine5 NHS ester,然后就可以用共聚焦的633 nm laser 激发来观察
3楼2015-12-30 09:18:58
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liuanan

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markar: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励一下! 2015-12-31 09:32:24
Cyanine5 NHS ester不能与羧基反应,另找氨基的染料分子
4楼2015-12-31 00:37:37
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liuanan

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markar: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励一下! 2015-12-31 09:32:46
你的DNA是绿光标记的,那你就用蓝光或红光标记纳米材料,比如http://www.fanbobiochemicals.com.cn/product/show-294.html
你的DNA肯定不是GFP标记的,GFP是蛋白,体积太大
7楼2015-12-31 09:10:36
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liuanan

专家顾问 (著名写手)

Cy3是黄色光,容易与绿光串色。
11楼2015-12-31 11:12:04
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stonegold

至尊木虫 (知名作家)

铁杆木虫

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuanan at 2015-12-30 03:13:38
你的纳米材料上有很多羧基,用带氨基的染料分子通过EDC,NHS修饰。选用的染料分子与DNA标记的染料分子不要在同一个波段。

我使用的DNA是绿色荧光蛋白标记的,麻烦您能不能给出一个具体的染料分子,我对这个实在是没有概念呀,拜托您啦!
5楼2015-12-31 08:58:51
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stonegold

至尊木虫 (知名作家)

铁杆木虫

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4楼: Originally posted by liuanan at 2015-12-31 00:37:37
Cyanine5 NHS ester不能与羧基反应,另找氨基的染料分子

必须是氨基的,不能是NH3+,对吗?您能不能给点具体建议,我对这个一点头绪也没有,我是个做杂化材料的,原来没有做过这类实验,拜托你啦。
6楼2015-12-31 09:01:55
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stonegold

至尊木虫 (知名作家)

铁杆木虫

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2楼: Originally posted by liuanan at 2015-12-30 03:13:38
你的纳米材料上有很多羧基,用带氨基的染料分子通过EDC,NHS修饰。选用的染料分子与DNA标记的染料分子不要在同一个波段。

Cy3胺 Cyanine3 amine
Cyanine3 is an fluorophore with free amino group (amino-dye). It can be conjugated with NHS esters, carboxy groups (after activation), and epoxides.

文章链接:中国环保在线 http://www.hbzhan.com/Company_news/Detail/183632.html
你觉得这个胺可以吗?
8楼2015-12-31 09:41:19
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stonegold

至尊木虫 (知名作家)

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引用回帖:
4楼: Originally posted by liuanan at 2015-12-31 00:37:37
Cyanine5 NHS ester不能与羧基反应,另找氨基的染料分子

Cy3胺 Cyanine3 amine
Cyanine3 is an fluorophore with free amino group (amino-dye). It can be conjugated with NHS esters, carboxy groups (after activation), and epoxides.

文章链接:中国环保在线 http://www.hbzhan.com/Company_news/Detail/183632.html
这个染料可以吗?
9楼2015-12-31 09:41:45
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stonegold

至尊木虫 (知名作家)

铁杆木虫

引用回帖:
7楼: Originally posted by liuanan at 2015-12-31 09:10:36
你的DNA是绿光标记的,那你就用蓝光或红光标记纳米材料,比如http://www.fanbobiochemicals.com.cn/product/show-294.html
你的DNA肯定不是GFP标记的,GFP是蛋白,体积太大

DNA上标记的东东应该是转染之后可以表达绿色荧光蛋白的那种。再弱弱的问一句,苯环上的氨基,使用EDC和NHS来和羧基交联可以吗?
10楼2015-12-31 10:32:44
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