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ivirus

金虫 (正式写手)

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注册: 2013-04-26
性别: GG
专业: 病毒学

[求助] 关于外源质粒重组和转座DH10-MultiBac杆状病毒表达系统，表达蛋白，求助！！已有1人参与

目前用DH10-MultiBac杆状病毒表达系统，表达多个外源基因。外源基因我分别用了两个质粒装载，分别用A和B表示吧，其中一个质粒（A）通过T7n转座到MultiBac，另外的一个质粒（B）通过LoxP位点重组到MultiBac上，原理是这个原理。可是实际做的时候发现，将A质粒单独转化到DH10-MultiBac感受态细胞中，通过T7n转座，进行蓝白斑挑选，挑出来的白斑也能P出300带。单独转化B质粒到DH10-MultiBac感受态细胞中，没有长菌斑。要是同时将A和B质粒同时转化DH10-MultiBac感受态细胞，压根一个菌斑也没有！！来来回回折腾了一个月了，老板催的着急，，，，还请虫友们帮帮忙分析分析哦哦！！！谢谢谢谢谢谢谢啦啊啊啊啊啊

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奔三的年纪想换个环境

1楼 2015-12-29 10:49:26

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总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)

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专业: 生物化工与食品化工

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ivirus: 金币+10, ★有帮助, 谢谢LZ的建议！！！ 2016-01-01 12:35:56

就蛋白表达来说首先楼主要看你的宿主菌有没有跟你的质粒载体有相同的抗性，其次他们的特点你是否了解，简单来说蛋白表达一般有问题都要从最基本的入手，宿主菌的选择，稀有密码子的存在，确定载体序列是否正确,启示子、终止子的正确性，诱导条件等等，楼主可以看看有没有人做过此类实验，有的话更好，没有只能自己摸索蛋白表达系统优化条件了。

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我好累，承受这个年纪不该有的帅！

2楼2015-12-30 09:19:38