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[交流]
淀粉凝胶电泳具体方法！！！
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各位大神，本人最近参考文献做血红蛋白的淀粉凝胶电泳（其他电泳均试过不能满足要求，只好照文献做，知道这种方法已经很少人用） 有谁做过这种电泳，我想问几个问题 ： a）淀粉我用的是国产标注用于电泳的马铃薯淀粉，不知微波炉加热多久合适，试过加热两分钟，冷却后也无法凝结成胶，想试试更短时间，希望大神提供一个参考值！ b）蛋白上样，为了不漂孔，用了甘油，另外还有pH8.8的buffer，按道理蛋白应该带上负电荷，电泳过程中向正极移动，但是我的样品在电压110V（~6V/cm2)下，2小时也只运动了半个厘米。文献中用的上样方法是用滤纸条吸取蛋白液插入样品孔（但是没有提蛋白用了什么buffer），想问问做过的大神知道解决这个问题！！！ c）跑完后的染色，我用的是考马斯亮蓝，理论上也是可以染的，但是染色后很难脱色，毕竟胶比较厚，文献用氨基黑10B，理论灵敏度不及考马斯亮蓝。想问问大神用啥染用啥脱色！！ 以上问题希望得到大家的解答，即使没做过也可以根据理解给个建议，我在此先谢过了！！ PS 发现自己没有金币了。。。拼个人品吧！ |
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