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迷你骑士

新虫 (初入文坛)

[交流] 淀粉凝胶电泳具体方法!!!

各位大神,本人最近参考文献做血红蛋白的淀粉凝胶电泳(其他电泳均试过不能满足要求,只好照文献做,知道这种方法已经很少人用)
有谁做过这种电泳,我想问几个问题 :
a)淀粉我用的是国产标注用于电泳的马铃薯淀粉,不知微波炉加热多久合适,试过加热两分钟,冷却后也无法凝结成胶,想试试更短时间,希望大神提供一个参考值!
b)蛋白上样,为了不漂孔,用了甘油,另外还有pH8.8的buffer,按道理蛋白应该带上负电荷,电泳过程中向正极移动,但是我的样品在电压110V(~6V/cm2)下,2小时也只运动了半个厘米。文献中用的上样方法是用滤纸条吸取蛋白液插入样品孔(但是没有提蛋白用了什么buffer),想问问做过的大神知道解决这个问题!!!
c)跑完后的染色,我用的是考马斯亮蓝,理论上也是可以染的,但是染色后很难脱色,毕竟胶比较厚,文献用氨基黑10B,理论灵敏度不及考马斯亮蓝。想问问大神用啥染用啥脱色!!
以上问题希望得到大家的解答,即使没做过也可以根据理解给个建议,我在此先谢过了!!

PS  发现自己没有金币了。。。拼个人品吧!
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