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110147加油

金虫 (小有名气)

[求助] 求教配方是否有问题

这是跑完之后的条带,目标蛋白大概3000左右…求解释…

求教配方是否有问题


求教配方是否有问题-1


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110147加油

金虫 (小有名气)

这个配方该怎么修改呢?求解

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3楼2015-12-29 10:47:59
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110147加油

金虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 110147加油 at 2015-12-28 22:43:20
这是跑完之后的条带,目标蛋白大概3000左右…求解释…


...

3C丙烯酰胺储存液:24g丙烯酰胺+0.75g甲叉双丙烯酰胺加水定容至50ml过滤 4℃保存
6C 凝胶储存液:23.25g丙烯酰胺+1.5g甲叉双丙烯酰胺加水定容到50ml过滤4℃保存。
30%凝胶缓冲溶液:取30g丙烯酰胺,0.8g甲叉双丙烯酰胺,先用约50mLdH2O溶解,如溶解不完全,可加热至30~50℃溶解,在定容至100mL,然后过滤,置于棕色瓶,4℃下保存备用。
凝胶缓冲溶液:36.342g Tris +0.3g SDS加水定容到100ml,HCl调pH至8.45 过滤4℃保存。
3X凝胶缓冲液液:18.15g Tris,0.15gSDS,溶于40ml水中,用1mol/L的HCL滴定至PH8.45再加水至50ml。 阳极电泳缓冲溶液:0.2M Tris (pH 8.9)(12.114g Tris) 加水定容到500ml  4℃保存。
阴极电泳缓冲溶液: 0.1M Tris+0.1M Tricine +0.1%SDS 不用调pH
                  6.057  Tris+8.96gTricine +0.5gSDS 加水定容到500ml  4℃保存。
10%(m/V)过硫酸铵(AP) 溶液:取2g过硫酸铵于dH2O溶解后,定容至20mL,现配现用。
1mol/LHCl 500mL:取浓HCl(36%~38%)42mL,慢慢加入蒸馏水中,边加边搅拌,加dH2O定容至500mL,在通风橱中操作。
10%(m/V)SDS溶液:取5gSDS加dH2O定容至50mL(加热溶解)
10%(m/V)TEMED(四甲基乙二胺):用dH2O配20mL(师姐有)
染色液:取1g考马斯亮蓝R-250,加入450mL甲醇和100mL冰乙酸,用去离子水定容至1000mL。 脱色液:29.2gNaCl,加去离子水定容到1000mL。
样品溶解液:取SDS 2g,β-巯基乙醇5mL,甘油10mL,溴酚蓝0.1g、0.5mol/LTris-HCl (pH 6.8)缓冲液10mL,加去离子水25mL,使总体积为50mL,装于棕色瓶。

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2楼2015-12-28 22:44:36
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