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求体外酶活检测的方法，如果可以能写出流程不 |
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送红花一朵 7楼2015-12-30 13:19:36
2楼2015-12-28 16:47:47
yyy0305
至尊木虫 (著名写手)
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3楼2015-12-28 21:57:31
肖大爷1314
金虫 (小有名气)
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- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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还原法 酶与底物在特定的条件下反应,酶可以促使底物释放出还原性的基团.在此反应体系中添加化学试剂 ,酶促反应的产物可与该化学试剂发生反应,生成有色物质.通过在特定的波长下 比色 ,即可求 出还原产物的含量 ,从而计算出酶活力的大小 . 色原底物法 通过底物与特定的可溶性生色基团物质结合,合成人工底物.该底物与酶发生反应后 ,生色基团可被释放出来 ,用分光光度法即可测定颜色的深浅,在与已知标准酶所做的曲线比较后 ,即可求出待测酶的活力. 粘度法 该法常用于测定纤维素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶 的活力.木聚糖和β-葡聚糖溶液通常情况下可形成极高的粘度,当酶作用于粘性底物时木聚糖和β-葡聚糖会被切割成较小的分子使其粘度大 为降低.基 于Poiseuille定律我们知道 ,只要测定一定条件下溶剂和样品溶液的运动粘度,便可计算特性粘数,并以此来判断酶的活力. 高压液相色谱法 酶与其底物在特定的条件下充分反应后 ,在一定的色谱条件下从反应体系中提取溶液进行色谱分析,认真记录保留时间和色谱图,测量各个样的峰高和半峰高,计算出酶促反应生成物的含量 ,从而换算出酶活力的数值. 免疫学方法 常用 于酶活性分析的免疫学方法包括:免疫电泳法 、免疫凝胶扩散法.这两种方法都是根据酶与其抗体之间可发生特定的沉淀反应 ,通过待测酶和标准酶的比较,最终确定酶活力.免疫学方法检侧度非常灵敏,可检侧出经过极度稀释后样品中的酶蛋白,但其缺点是不同厂家生产的酶产品需要有不同特定的抗体发生反应. 琼脂凝胶扩散法 将酶作用的底物与琼脂混合熔融后 ,倒入培养皿中或载波片上制成琼脂平板.用打孔器在琼脂平面上打出一个约4-5mm半径 的小孔.在点加酶样并培养24h以后 ,用染色剂显色或用展开剂展开显出水解区,利用水解直径和酶活力关系测定酶活力. 这个是类似问题，LZ可以参考一下http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=9719558 http://www.biomart.cn/experiment/430/478/485/56895.htm |
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4楼2015-12-29 13:16:35
