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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Stridegogogo

捐助贵宾 (小有名气)

小可爱

[求助] 定点突变扩质粒,设计的引物不是重叠的,但是质粒扩出来了,产物是环状的吗 已有1人参与

急急急,如题,我做质粒定点突变,目的片段扩出来了,但是我用得磷酸化酶磷酸化然后T4ligase 连接,连接之后转化不长菌?我觉得是不是不应该这么做,直接PCR产物DPN1消化后转化可以吗 所以想问用Pristar primix 扩出来的产物到底是环形还是线性???
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分子克隆与蛋白结晶
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安群星

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
设计的引物带突变位点,运用扩增全场质粒定点突变,得到的产物是环状的带突变位点的质粒,不过其中还有加入的野生型的质粒,因而PCR之后用DpnI酶切消化掉原有的未突变的质粒模板,再产物纯化一下,就是突变后的环状质粒了,直接转化。速度很快的
2楼2015-12-26 15:53:54
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