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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定点突变扩质粒，设计的引物不是重叠的，但是质粒扩出来了，产物是环状的吗
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Stridegogogo

捐助贵宾 (小有名气)

小可爱

[求助] 定点突变扩质粒，设计的引物不是重叠的，但是质粒扩出来了，产物是环状的吗 已有1人参与

急急急，如题，我做质粒定点突变，目的片段扩出来了，但是我用得磷酸化酶磷酸化然后T4ligase 连接，连接之后转化不长菌？我觉得是不是不应该这么做，直接PCR产物DPN1消化后转化可以吗 所以想问用Pristar primix 扩出来的产物到底是环形还是线性？？？
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1楼 2015-12-26 15:26:19
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安群星

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
设计的引物带突变位点，运用扩增全场质粒定点突变，得到的产物是环状的带突变位点的质粒，不过其中还有加入的野生型的质粒，因而PCR之后用DpnI酶切消化掉原有的未突变的质粒模板，再产物纯化一下，就是突变后的环状质粒了，直接转化。速度很快的
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2楼2015-12-26 15:53:54
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