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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞在冻存过程中（-80℃）冻存液变黄是什么原因？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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jlee2012

木虫 (小有名气)

[求助] 细胞在冻存过程中（-80℃）冻存液变黄是什么原因？ 已有6人参与

如题，而且复苏效果极差（贴壁细胞）！（冻存液配方FBS：DMEM：DMSO=50:30:20）
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1楼 2015-12-25 12:30:14
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肖大爷1314

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jlee2012: 金币+5, ★有帮助 2015-12-25 15:07:18
跟你的冻存液的配方有关，FBS加多了当然是黄的，DMEM加的多就是红的，不过既然复苏效果不好，要不要考虑试试FBSMSO 9:1 ？虽然现在血清很贵很贵~~~~我复苏的时候一般是MDED:FBSMSO 7：2：1，也有6:6:2的~个人经验是复苏时最后将细胞复苏在正常细胞培养血清浓度两倍的培养基（而且至少要高于10%），不然细胞很容易死
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追求真理的道路上永远不会孤独
2楼2015-12-25 14:53:06
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jlee2012

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肖大爷1314 at 2015-12-25 14:53:06
跟你的冻存液的配方有关，FBS加多了当然是黄的，DMEM加的多就是红的，不过既然复苏效果不好，要不要考虑试试FBSMSO 9:1 ？虽然现在血清很贵很贵~~~~我复苏的时候一般是MDED:FBSMSO 7：2：1，也有6:6:2的~个人经 ...

冻存液刚配好时是红色的~过了三个月来看发现都是黄色的了！会不会细胞消耗了？
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3楼2015-12-25 15:08:28
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肖大爷1314

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jlee2012 at 2015-12-25 15:08:28
冻存液刚配好时是红色的~过了三个月来看发现都是黄色的了！会不会细胞消耗了？...

毕竟细胞冻存也不是完全停止代谢活动的，祝顺利啊，你改改配方估计就没这问题了~
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追求真理的道路上永远不会孤独
4楼2015-12-25 15:27:55
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126keven

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jlee2012: 金币+1, ★有帮助 2015-12-28 11:14:07
我用的FBS：dmso9：1，效果挺好，且如果这么配本来就是黄色的
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5楼2015-12-25 21:29:39
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jlee2012: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-12-28 11:15:09
谁跟你说的需要20%DMSO，对于DMSO的量，每个细胞可能是不同的，但一般也是5%-10%之间，具体可以去ATCC查看，
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
6楼2015-12-25 22:39:44
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renbingling

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
20%的dmso我都怀疑在-20摄氏度时能不能结晶，-80摄氏度能不能形成玻璃态，而且细胞复苏的存活率原因很多，有冻存方式：是否程序降温，有复溶方式等，所以你把整个冻存复溶过程摆出来才好做原因分析。
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细胞大规模培养工艺
7楼2015-12-26 13:49:15
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jzhwang2007

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jlee2012: 金币+1, ★有帮助 2015-12-28 11:17:29
DMSO太高了，建议10％，那东西是有毒性的，会影响复苏效果。变黄是因为pH在冻存中发生了变化，特别是在血清浓度20％的情况下，冻上后就是黄的了，不想变黄可以用10％FBS试试。注意程序降温，快速回融。
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8楼2015-12-26 14:51:38
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Emily9517

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肖大爷1314 at 2015-12-25 14:53:06
跟你的冻存液的配方有关，FBS加多了当然是黄的，DMEM加的多就是红的，不过既然复苏效果不好，要不要考虑试试FBSMSO 9:1 ？虽然现在血清很贵很贵~~~~我复苏的时候一般是MDED:FBSMSO 7：2：1，也有6:6:2的~个人经 ...

经验贴啊～膜拜

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9楼2015-12-26 15:06:12
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jlee2012: 金币+1, ★有帮助 2015-12-28 13:09:38
将DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占总体积的10%，然后滤膜过滤后分装保存备用。
DMSO一般要用新鲜的，分装保存，如果多次开评后，可能受氧化而变质，如果你的DMSO颜色为黄色，表示已经变质，不可用。
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10楼2015-12-26 15:32:54
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