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chhcll

新虫 (小有名气)

[交流] 提取老叶DNA提不出来怎么办?

大家好,我是八月份采的材料,材料比较老,提DNA时什么都提不出来,是我的裂解液加得太少了(材料称0.2g)还是杂质太多,我用得是试剂盒,第一张图片上前四个孔是新材料,后六个是老叶,第二张图片是PCR, 前四孔也是嫰材料,后六个是老叶,如果用老叶的话怎么改进方法,求助各位,实在等不到明年采材料了,想抓紧时间写论文,谢谢大家了。

提取老叶DNA提不出来怎么办?


提取老叶DNA提不出来怎么办?-1


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溪偌飘纤

新虫 (初入文坛)


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我们实验室一般都是提取的老叶片,1980年的都有,而且是苔藓植物,植株小,标本少,因此用量也不能太多,特别不好提,每次都只用2-5mg左右,采用的改良CTAB法,效果不错,尽量选取绿色的叶片,效果会好很多
16楼2016-01-04 09:52:28
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heianduck

金虫 (正式写手)


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你老叶子是怎么保存的??

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2楼2015-12-25 07:36:02
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chhcll

新虫 (小有名气)

3楼2015-12-25 08:27:02
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xygcdmr

木虫 (小有名气)


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老叶需要研磨的更充分,不像新叶弄点汁液出来就够了。可以先不用试剂盒,加大取样量和提取液的量试试。
4楼2015-12-25 21:51:32
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chhcll

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by heianduck at 2015-12-25 07:36:02
你老叶子是怎么保存的??

负20冰箱

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5楼2015-12-25 22:02:03
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蕨类森林

新虫 (小有名气)


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研磨的时候一直液氮里吗?不然有可能讲解,研磨充分吗~还有上样量会不会多了~我前段时间做时不好时就主要是这些原因~

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6楼2015-12-28 11:13:01
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HELIX3

金虫 (初入文坛)


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-20保存有可能降解了,换ctab试试吧,液氮充分研磨,跟物种也有很大关系,是不是不容易抽提的物种,搜一下这种物种的ctab法试试
7楼2015-12-28 12:42:14
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草溪河

铁虫 (著名写手)


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换换CTAB法吧,这个方法虽然繁琐,但比试剂盒效果好多了,多换换方法,总会有合适的。还有就是老叶片里的次级代谢物如酚多糖之类的会很多,注意方法的修改。你的样品也可能有问题,一般都是用液氮处理后放于-80度的。老叶片和新叶片的DNA不都一样吗?

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8楼2015-12-28 13:36:12
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草溪河

铁虫 (著名写手)

你第二张图的DNA MARKER多大的呀?怎么DNA跑那么快啊?

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9楼2015-12-28 13:38:04
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chhcll

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 草溪河 at 2015-12-28 13:38:04
你第二张图的DNA MARKER多大的呀?怎么DNA跑那么快啊?

maker 3ul

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10楼2015-12-28 13:49:46
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