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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提取老叶DNA提不出来怎么办？
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chhcll

新虫 (小有名气)

[交流] 提取老叶DNA提不出来怎么办？

大家好，我是八月份采的材料，材料比较老，提DNA时什么都提不出来，是我的裂解液加得太少了（材料称0.2g）还是杂质太多，我用得是试剂盒，第一张图片上前四个孔是新材料，后六个是老叶，第二张图片是PCR, 前四孔也是嫰材料，后六个是老叶，如果用老叶的话怎么改进方法，求助各位，实在等不到明年采材料了，想抓紧时间写论文，谢谢大家了。

提取老叶DNA提不出来怎么办？


提取老叶DNA提不出来怎么办？-1


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1楼 2015-12-25 07:34:35
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溪偌飘纤

新虫 (初入文坛)
★
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我们实验室一般都是提取的老叶片，1980年的都有，而且是苔藓植物，植株小，标本少，因此用量也不能太多，特别不好提，每次都只用2-5mg左右，采用的改良CTAB法，效果不错，尽量选取绿色的叶片，效果会好很多
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16楼2016-01-04 09:52:28
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heianduck

金虫 (正式写手)
★
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你老叶子是怎么保存的？？

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2楼2015-12-25 07:36:02
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chhcll

新虫 (小有名气)
负20冰箱

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3楼2015-12-25 08:27:02
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xygcdmr

木虫 (小有名气)
★
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老叶需要研磨的更充分，不像新叶弄点汁液出来就够了。可以先不用试剂盒，加大取样量和提取液的量试试。
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4楼2015-12-25 21:51:32
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chhcll

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by heianduck at 2015-12-25 07:36:02
你老叶子是怎么保存的？？

负20冰箱

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5楼2015-12-25 22:02:03
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蕨类森林

新虫 (小有名气)
★
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研磨的时候一直液氮里吗？不然有可能讲解，研磨充分吗～还有上样量会不会多了～我前段时间做时不好时就主要是这些原因～

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6楼2015-12-28 11:13:01
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HELIX3

金虫 (初入文坛)
★
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-20保存有可能降解了，换ctab试试吧，液氮充分研磨，跟物种也有很大关系，是不是不容易抽提的物种，搜一下这种物种的ctab法试试
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7楼2015-12-28 12:42:14
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草溪河

铁虫 (著名写手)
★
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换换CTAB法吧，这个方法虽然繁琐，但比试剂盒效果好多了，多换换方法，总会有合适的。还有就是老叶片里的次级代谢物如酚多糖之类的会很多，注意方法的修改。你的样品也可能有问题，一般都是用液氮处理后放于-80度的。老叶片和新叶片的DNA不都一样吗？

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8楼2015-12-28 13:36:12
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草溪河

铁虫 (著名写手)
你第二张图的DNA MARKER多大的呀？怎么DNA跑那么快啊？

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9楼2015-12-28 13:38:04
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chhcll

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 草溪河 at 2015-12-28 13:38:04
你第二张图的DNA MARKER多大的呀？怎么DNA跑那么快啊？

maker 3ul

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10楼2015-12-28 13:49:46
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