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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提取老叶DNA提不出来怎么办？
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chhcll

新虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by HELIX3 at 2015-12-28 12:42:14
-20保存有可能降解了，换ctab试试吧，液氮充分研磨，跟物种也有很大关系，是不是不容易抽提的物种，搜一下这种物种的ctab法试试

是木本植物牡丹，含酚类物质较多

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11楼2015-12-28 13:52:50
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chhcll

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by chhcll at 2015-12-28 13:52:50
是木本植物牡丹，含酚类物质较多
...

之前试过CTAB法，也是提不出来，而且最后提取时黄色的晶体，不知道怎么回事了。

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12楼2015-12-28 13:54:00
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chhcll

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 蕨类森林 at 2015-12-28 11:13:01
研磨的时候一直液氮里吗？不然有可能讲解，研磨充分吗～还有上样量会不会多了～我前段时间做时不好时就主要是这些原因～

研磨一直在液氮里，研磨三四次直至粉末状了

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13楼2015-12-28 13:55:57
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草溪河

铁虫 (著名写手)
★
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10楼: Originally posted by chhcll at 2015-12-28 13:49:46
maker 3ul
...

是问多大的条带？CTAB提的时候可以试着少加些样，尽量使裂解液抑制住酚类等物质

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14楼2015-12-28 23:23:09
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蕨类森林

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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13楼: Originally posted by chhcll at 2015-12-28 13:55:57
研磨一直在液氮里，研磨三四次直至粉末状了
...

嗯，那我不清楚了，我一次是因为提取液没配好，一次是点样时上样量太多了～

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15楼2015-12-29 10:03:35
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溪偌飘纤

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们实验室一般都是提取的老叶片，1980年的都有，而且是苔藓植物，植株小，标本少，因此用量也不能太多，特别不好提，每次都只用2-5mg左右，采用的改良CTAB法，效果不错，尽量选取绿色的叶片，效果会好很多
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16楼2016-01-04 09:52:28
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反应链

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
You could try this protocol, which is very useful for plant total DNA extraction.

3% CTAB DNA extracion protocol
(modified from Zeng et al. 2002, ACta Botanica Sinica 44; 694-697)

1. washing out polysaccharides with CTAB-free buffer from homogenate.
2. increasing the percentage of CTAB in extraction medium.
3. using high concentration salts pior to DNA precipitation with isopanol.

提取老叶DNA提不出来怎么办？
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17楼2016-01-05 21:46:36
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